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        豬流行性腹瀉抗體(PED Ab)ELISA試劑盒說明書

        發(fā)布日期: 2011-01-05
        瀏覽人氣: 2639

         

                                                                             96T
         
        使用目的:
        本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中流行性腹瀉抗體(PED Ab)表達(dá)。
        實驗原理
        本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中豬流行性腹瀉抗體(PED Ab)表達(dá)。用純化的豬流行性腹瀉(PED)抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中流行性腹瀉抗體(PED Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的流行性腹瀉(PED結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中流行性腹瀉抗體(PED Ab)的存在與否。
        試劑盒組成

        1
        30倍濃縮洗滌液
        20ml×1瓶
        7
        終止液
        6ml×1瓶
        2
        酶標(biāo)試劑
        6ml×1瓶
        8
        陽性對照
        0.5ml×1瓶
        3
        酶標(biāo)包被板
        12孔×8條
        9
        陰性對照
        0.5ml×1瓶
        4
        樣品稀釋液
        6ml×1瓶
        10
        說明書
        1份
        5
        顯色劑A液
        6ml×1瓶
        11
        封板膜
        2張 
        6
        顯色劑B液
        6ml×1/瓶
        12
        密封袋
        1個

        標(biāo)本要求
        1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
        1.         編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
         
         
        2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
        3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
        4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
        5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
        6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
        7.         溫育:操作同3。
        8.         洗滌:操作同5。
        9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
        10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
        11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
         
         
        計算和結(jié)果判定:
          試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
         臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
         陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為豬流行性腹瀉抗體(PED Ab)陰性
         陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為豬流行性腹瀉抗體(PED Ab)陽性
        。
        注意事項
        1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。
        2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
        3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
        4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        5.底物請避光保存。
        6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
        7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
        保存條件及有效期
        1.試劑盒保存:;2-8
        2.有效期:6個月
         
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