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        豬傳染性胃腸炎抗體(TGE-Ab)ELISA試劑盒說明書

        發(fā)布日期: 2011-01-06
        瀏覽人氣: 1716

         

                                                                             96T
         
        使用目的:
        豬傳染性胃腸炎抗體試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中傳染性胃腸炎抗體(TGE Ab)表達。
        實驗原理
        本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬傳染性胃腸炎抗體(TGE Ab)表達。用純化的豬傳染性胃腸炎 (TGE)抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中傳染性胃腸炎抗體(TGE Ab)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的傳染性胃腸炎 (TGE)抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬傳染性胃腸炎抗體(TGE Ab)的存在與否。

        1
        30倍濃縮洗滌液
        20ml×1瓶
        7
        終止液
        6ml×1瓶
        2
        酶標試劑
        6ml×1瓶
        8
        陽性對照
        0.5ml×1瓶
        3
        酶標包被板
        12孔×8條
        9
        陰性對照
        0.5ml×1瓶
        4
        樣品稀釋液
        6ml×1瓶
        10
        說明書
        1份
        5
        顯色劑A液
        6ml×1瓶
        11
        封板膜
        2張 
        6
        顯色劑B液
        6ml×1/瓶
        12
        密封袋
        1個

        標本要求
        1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
        操作步驟
        1.         編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
         
         
        2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
        3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
        4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
        5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
        6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
        7.         溫育:操作同3。
        8.         洗滌:操作同5。
        9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
        10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
         
         
         
         
          試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
         臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
         陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為傳染性胃腸炎抗體(TGE Ab)陰性
         陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為傳染性胃腸炎抗體(TGE Ab)陽性
        注意事項
        1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
        2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
        3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
        4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        5.底物請避光保存。
        6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
        7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
        保存條件及有效期
        1.試劑盒保存:;2-8。
        2.有效期:6個月
         
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