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        酸性轉(zhuǎn)化酶活性計算說明

        發(fā)布日期: 2021-03-12
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          蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)*適 pH,將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI)兩種類型。AI主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中,*適 pH 為4.5~5.0(酸性),通過降解液泡中蔗糖,調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實(shí)內(nèi)糖類的積累。AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。

          酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)的活性計算如下:

          標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.0016x-0.001;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(µg/mL),y為吸光值。

        (1)按蛋白濃度計算

          單位定義:37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1µg還原糖定義為一個酶活性單位。

          NI活性(U/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷Cpr

        (2)按鮮重計算

          單位定義:37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1µg還原糖定義為一個酶活性單位。

          NI活性(U/g)=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷W

          V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;T:反應(yīng)時間:30min。

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