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        bca法測蛋白濃度步驟

        發(fā)布日期: 2024-01-30
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        bca法是常用蛋白濃度測定方法之一。其他蛋白濃度測定方法還有考馬斯亮藍法、bradford法測蛋白濃度等。本文是用bca法測定蛋白濃度。是使用索萊寶BCA蛋白濃度測定試劑盒完成本實驗。

        下面是bca法測蛋白濃度步驟:

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取一塊酶標(biāo)板,按照下表加入試劑 ;

        2. 根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻;    

        3. 各孔加入200μL BCA工作液;    

        4. 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec,37℃放置30分鐘,然后在562nm下比色測定。以蛋白含量(μg)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線;   

        5. 稀釋待測樣品至合適濃度,使樣品稀釋液總體積為20μL,加入BCA工作液200μL,充分混勻,37℃放置30分鐘后,以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號管做參比,在 562nm波長下比色,記錄吸光值;     

        6. 根據(jù)所測樣品的吸光值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白含量(μg),除以樣品稀釋液總體積(20μL),乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實際濃度(單 位:μg/μL)。

        【bca法優(yōu)缺點】 

        (一) 操作簡單,快速,45分鐘內(nèi)完成測定,比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便; 

        (二) 準(zhǔn)確靈敏,試劑穩(wěn)定性好,BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20-200μg/ml,微量BCA測定范圍在0.5-10μg/ml。 

        (三) 經(jīng)濟實用,除 試管 外,測定可在微板孔中就進行,大大節(jié)約樣品和試劑用量; 

        (四) 抗試劑干擾能力比較強,如去垢劑,尿素等均無影響


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