亚洲AV无码久久,久草精品首页,97精品资源,九一福利区,三级三级三级日本99

  • <style id="ldh3x"></style>
        歡迎光臨北京索萊寶科技有限公司網(wǎng)站!
        銷售咨詢熱線:
        17801761073
        產(chǎn)品目錄
        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > Cell Counting Kit-8

        Cell Counting Kit-8

        發(fā)布日期: 2016-03-22
        瀏覽人氣: 2102

        Cell Counting Kit-8

        產(chǎn)品簡介:     Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗

        使用說明:

        一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測定細(xì)胞具體數(shù)量時

        1先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞。 

        2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度,一般要做3-5個細(xì)胞濃度梯度,每組3-6個復(fù)孔。

        3、接種后培養(yǎng)細(xì)胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值,制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸),OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。)

        二、細(xì)胞活性檢測

        1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37,5% CO2的條件下)。 

        2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。 

        3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。 

        4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。 

        5、如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

        三、細(xì)胞增值-毒性檢測

        1、在96孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37 ,5% CO2的條件下)。 

        2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6、12、24或48小時)。

        3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。

        4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

        5、用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。

        6、如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

        活力計算:.

        細(xì)胞活力%)=[A(加藥)A(空白)][ A(0加藥)A(空白)]×100 

        A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度 

        A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度 

        A(0 加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度 

        細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

        注意事項: 

        建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。 

        白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。 

        當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時,貼壁細(xì)胞的小接種量少為1 ,000個/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 ( 100 μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8溶液。 

        如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm檢測靈敏度高。 

        培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

        分享到:
        福利导航成人| 开原市| 97超碰人妻在线| 伊人久久五月天| 久久久久人妻精品色欧美| 和林格尔县| 亚洲无码一级| 无码人妻一区二区三区在线播放| 东乡族自治县| 囯产精品久久久久久久久久| 丁香五月少妇| 亚洲熟妇在线| 亚洲+变态+欧美+另类+精品 | 精品少妇无码AV无码专区 | 久久久激情网| 青青草国产在线| 成人免费看黄| 欧美精品第二页| 呦呦网址| 青青操大香蕉| 精品一区二区三区人妻| 人人妻人人澡人人爽精品日本| 女同在线一区二区| 靖远县| 91丨熟女丨丰满熟女| 国产suv精品一区二区| 人妻激情一区二区三区| 婷婷五月天激情网| 中文字幕无码人妻在线二区 | 甘南县| 久久加勒比| 中文亚洲欧美日韩无线码| 迭部县| 午夜福利10000| 国产激情综合五月久久| 国产人妻一区二区三区四区五区六| 国产高清无码在线| 久久舔| 欧美日韩成人一区二区在线观看 | 精品人妻无码中文字幕18禁| 97视频|