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        什么是LB培養(yǎng)基,以及LB培養(yǎng)基的分類

        發(fā)布日期: 2016-05-23
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         什么是LB培養(yǎng)基?LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,是微生物學(xué)實驗中常用的培養(yǎng)基,生化分子實驗中一般用該培養(yǎng)基來預(yù)培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。
        LB培養(yǎng)基的分類
              液態(tài)LB培養(yǎng)基
              根據(jù)《分子克隆實驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基,應(yīng)該在950 ml去離子水中加入:
              蛋白胨    10g
              酵母提取物    5g
              NaCl     10g
              搖動容器直溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH7.0.用去離子水定容1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
              培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌.通過培養(yǎng)工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒,工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎(chǔ).
              LB培養(yǎng)基的配方如下:
              胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
              酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
              氯化鈉(NaCl) 10g/L
              另外根據(jù)經(jīng)驗值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達到7.4(該pH適合目前使用廣的原核表達菌種E.coli的生長)
              固態(tài)LB培養(yǎng)基
              LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣,加10g~15g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
              LB培養(yǎng)基的配制:
              成分
              胰蛋白胨(tryptone)        10g
              酵母提取物(yeast extract)        5g
              氯化鈉(NaCl)       10g
              固體培養(yǎng)基另加 瓊脂粉        15-20g
              加雙蒸水1000mL, 用5mol/L NaOH(約0.2ml)調(diào)pH7.2,121℃滅菌30min
              配制方法
              (1)稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于燒杯中。
              (2)溶化 加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中,用玻棒攪拌,使藥品全部溶化。
              (3)調(diào)pH 用1mol/L NaOH溶液調(diào)pH7.2。
              (4)定容 將溶液倒入量筒中,加水所需體積。
              (5)加瓊脂 加入所需量瓊脂,加熱融化,補足失水。
              (6)分裝、加塞、包扎。
              (7)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。

              以上便是LB培養(yǎng)基的簡單介紹以及分類和配制方法。LB培養(yǎng)基由蛋白胨、酵母膏、nacl組成。先,蛋白胨是經(jīng)過胰酶處理過的蛋白,處理后,大分子的蛋白分子量變小,細(xì)菌更容易利用。此外,還含有嘌呤,提供生長因子。如要培養(yǎng)大腸桿菌,其實用普通蛋白胨代替胰蛋白胨是沒有問題的。

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