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        • 土壤淀*酶檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        土壤淀*酶檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-17
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        土壤淀*酶檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Soil Diastase Activity Assay Kit
        別名
        土壤淀*酶試劑盒 土壤淀*酶測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需自備試劑,詳情見(jiàn)網(wǎng)站說(shuō)明書(shū)

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC1925
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義:淀*酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤淀*酶(S-AL)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào):BC1925

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體20 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌或震蕩至粉劑溶解,用不完的試劑2-8保存一周。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg麥芽糖。臨用前加入1.38 mL蒸餾水配制成20 μmol/mL的儲(chǔ)備液,2-8保存兩周。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        淀*酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀*酶主要來(lái)自于微生物,是一種重要的酶制劑,廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。

        淀*酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖,可與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在540nm處有特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        天平、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、30~50目篩、研缽、甲苯(不允許快遞)。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。

        二、測(cè)定步驟

        1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,波長(zhǎng)調(diào)至540nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2. 20μmol/mL的麥芽糖儲(chǔ)備液用蒸餾水稀釋為 21、0.8、0.6、0.4μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度稀釋表

         

         

        序號(hào)

        稀釋前濃度(µmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(µmol/mL

        1

        20

        100

        900

        2

        2

        2

        500

        500

        1

        3

        1

        400

        100

        0.8

        4

        1

        300

        200

        0.6

        5

        1

        200

        300

        0.4

        備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需60µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        4. 操作表:

        試劑名稱

        測(cè)定管

        對(duì)照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        土樣(g

        0.05

        0.05

        -

        -

        甲苯(μL

        10

        10

        -

        -

        蒸餾水(μL

        -

        100



        試劑一(μL

        100

        100

        -

        -

        試劑二(μL

        100

        -

        -

        -

        充分震蕩混勻,37℃水浴或37℃恒溫箱培養(yǎng)24h,之后12000rpm,常溫離心10min,取上清。

        -

        -

        上清液(μL

        60

        60

        -

        -

        蒸餾水(μL

        -

        -

        -

        60

        標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL

        -

        -

        60

        -

        試劑三(μL

        140

        140

        140

        140

        充分混勻,沸水浴10min,置于冰上冷卻,于微量玻璃比色皿/96孔板中測(cè)定540nm處的吸光值,分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A空白管,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。(標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測(cè)1-2次)

        三、土壤淀*酶活力的計(jì)算

        1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測(cè)定(y,ΔA測(cè)定)帶入公式計(jì)算樣本濃度(x,μmol/mL

        2、酶活的計(jì)算:

        單位的定義:每天每g土樣產(chǎn)生1μmol還原糖定義為一個(gè)土壤淀*酶活力。

        S-ALU/g 土樣)= x×V反總÷W÷T=0.21×x÷W

        V反總:酶促反應(yīng)總體積,0.21mL;W:土樣質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,1d。

        注意事項(xiàng):

        1、 當(dāng)ΔA大于1.5時(shí),建議將上清液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,注意在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2、 ΔA測(cè)定較小,增加反應(yīng)的上清液體積或適當(dāng)增加酶促反應(yīng)時(shí)間,計(jì)算酶活時(shí)對(duì)公式進(jìn)行修改。

        3、 建議每次實(shí)驗(yàn)煮沸后的冷卻時(shí)間保持一致,吸光值請(qǐng)于30min內(nèi)測(cè)定完成。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:


         

        1、 0.05g土樣于1.5mLEP管中,依次加入10μL甲苯、100μL試劑一、100μL試劑二為測(cè)定管;取0.05g土樣于1.5mLEP管中,依次加入10μL甲苯、100μL試劑一、100μL蒸餾水為對(duì)照管,均放于37℃培養(yǎng)24h,后離心取上清再液稀釋3倍,之后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定 =A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.948-0.12=0.828,標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.7604x-0.158,x=1.297,按土樣質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        S-ALU/g 土樣)=0.21×x÷W×3(稀釋倍數(shù))=0.21×1.297÷0.05×3(稀釋倍數(shù))=16.34 U/g 土樣。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Kathiresan K, Manivannan S. α-Amylase production by Penicillium fellutanum isolated from mangrove rhizosphere soil[J]. African journal of Biotechnology, 2006, 5(10).

        [2] Ebregt A, Boldewijn J. Influence of heavy metals in spruce forest soil on amylase activity, CO 2 evolution from starch and soil respiration[J]. Plant and Soil, 1977, 47(1): 137-148.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0120/BC0125  土壤脲酶(S-UE)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0100/BC0105  土壤過(guò)氧化氫酶(S-CAT)活性檢測(cè)試劑盒

         土壤淀*酶檢測(cè)試劑盒 微量法 土壤淀*酶檢測(cè)試劑盒 微量法

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