漆酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC1635
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 工作液的配制：一瓶試劑二用10 mL試劑一溶解。現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明：
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一種環(huán)保型酶，其催化性質(zhì)在生物檢測(cè)中有廣泛的應(yīng)用。
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測(cè)定ABTS自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水，水浴鍋
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）   
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至420nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2. 水浴鍋溫度調(diào)至45℃。

3. 操作表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分別加入下列試劑：

注意事項(xiàng)：
1、工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。
2、測(cè)定前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣本用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下，OD值變化不超過(guò)0.05。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g香菇加1mL提取液進(jìn)行樣本處理，取上清后按照測(cè)定步驟操作，用微量玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.8963-0.1004=0.7959，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0729-0.0542=0.0187，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.7959-0.0187=0.7772，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

漆酶酶活（U/g 質(zhì)量）=61.7×ΔA÷W=61.7×0.7772÷0.1=479.53 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0200/BC0205 過(guò)氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒
BC0090/BC0095 過(guò)氧化物酶（POD）活性檢測(cè)試劑盒
 

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