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        • 親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
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        • 親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
        產(chǎn)品名稱:

        親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-20
        親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
        貨號:R8290
        規(guī)格: 10ml
        Protein A 是一種分離自金黃色葡萄球菌的細胞壁蛋白, 主要通過 Fc 片段結(jié)合哺乳動物IgG,但是不與狗 lgG 結(jié)合,不結(jié)合人 lgM、lgD 和 IgA。

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶

        親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
        貨號 :R8290
        規(guī)格 :5ml
        保存 :2-8℃


        產(chǎn)品 介紹 :
             Protein A 是一種分離自金黃色葡萄球菌的細胞壁蛋白, 主要通過 Fc 片段結(jié)合哺乳動物IgG,但是不與狗 lgG 結(jié)合,不結(jié)合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 與蛋白 G 不同來源及亞類的免疫球蛋白結(jié)合能力丌一樣,具體見表。天然 Protein A 有五個 IgG 結(jié)合區(qū)域和一些未知功能的區(qū)域,重組 protein A 去除了與白蛋白及細胞表面結(jié)合位點,只含有五個 IgG 結(jié)合區(qū)域,減少了非特異性吸附。


        rProtein A Beads  產(chǎn)品性能 :

        指標 性能
        基質(zhì)4%瓊脂糖微球
        配體重組蛋白 A
        載量 >4  0mg 人 I  gG/ml 介質(zhì)
        粒徑(µm)  45- 165
        大流速0.1 MPa, 1 bar
         pH 穩(wěn)定范圍 3-12
        儲存緩沖液20% 乙醇
        儲存溫度2°C-8°C


          Protein A  和   Protein G  對不同抗體的結(jié)合能力   :

        種屬 亞型Protein A  Protein G
        HumanIgA varible— 
        HumanIgD— — 
        HumanIgE— — 
        HumanIgG1++++++++
        HumanIgG2++++++++
        HumanIgG3— ++++
        HumanIgG4++++++++
        HumanIgM varible— 
        Avian egg yolkIgY— — 
        Cow  ++ ++++
        Dog  ++++++ 
        Goat —  ++++
        Guinea pigIgG1++++  ++
        Guinea pigIgG2++++  ++
        Hamster +++
        HorseTotal IgG    ++++++
        Koala — +
        Liama — +
        Monkey(rhesus) ++++++++
        MouseIgG1+++++
        MouseIgG2a ++++++++
        MouseIgG2b ++++++
        MouseIgG3+++++
        MouseIgMvariable
        Pig +++ +++ 
        Rabbit Total IgG+++++++ 
        RatIgG1+
        RatIgG2a++++
        RatIgG2b++
        RatIgG3+++
        Sheep Total IgG  +/- ++


        ++++=結(jié)合能力強;  ++=結(jié)合能力中等;  —=結(jié)合能力弱或沒有結(jié)合 


        純化流程 :
        1 、Buffer  的準備

        所用水和 Buffer 在使用之前建議用  0.22µm 或 0.45 µm 濾膜過濾。 
        結(jié)合/ 洗雜  Buffer:   0.15M NaCl,  20 mM Na 2 HPO 4 ,  pH 7.0
        洗脫  Buffer: 0.1M 甘氨酸,  pH 3.0
        中和液:   1M Tris-HCl, pH8.5


        2 、 樣品準備
             上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和 pH 值, 可以用結(jié)合/洗雜緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養(yǎng)液稀釋,或者樣品用結(jié)合/洗雜緩沖液透析。
             樣品在上樣前建議離心或用  0.22µm 或 0.45µm 濾膜過濾,減少雜質(zhì),提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。 
        3 、 樣品純化
            1) 將 rProtein A Beads 裝入合適的層析柱,層析用 5 倍柱體積的結(jié)合 Buffer 進行平衡,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護蛋白的作用。 
            2) 將樣品加到平衡好的 rProtein A Beads 中(保證目的蛋白與 rProtein A Beads 充分接觸,提高目的蛋白的回收率) ,收集流出液。 
            3) 用 10-15 倍柱體積的洗雜 Buffer 進行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。    

            4) 使用 5-10 倍柱體積的洗脫  Buffer,收集洗脫液,即目的蛋白組分。 
            5) 依次使用 3 倍柱體積的結(jié)合  Buffer 和 5 倍柱體積的去離子水平衡填料,后再用 5 倍柱 體積的 20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的 20%的乙醇中,置于 4 度保存,防止填料被細菌污染。

        
        4 、   SDS-PAGE  檢測
            將使用純化產(chǎn)品得到的樣品(包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分)以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測純化效果。 

         

        填料清洗
            rProtein A Beads 可以重復(fù)使用而無需再生, 但隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和結(jié)合載量都下降,嚴重影響柱子的性能,這時需要對樹脂進行清洗。
        去除一些沉淀或變性物質(zhì)用 2 倍柱體積的 6M 鹽酸胍溶液進行清洗,然后立即用 5 倍柱體積的   PBS, pH 7.4 清洗。
            去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
            用 3-4 倍柱體積的 70%乙醇或 2 倍柱體積的 1% Triton  X-100 清洗,然后然后立即用 5倍柱體積的   PBS, pH 7.4 清洗。 


        問題及解決方案

         原因分析推薦解決方案
        柱子反壓過高篩板被堵塞清洗或更換篩板
        柱子反壓過高填料被堵塞 按照填料清洗部分進行樹脂清洗
        柱子反壓過高填料被堵塞裂解液中含有微小的固體顆粒, 建議上柱
        前使用濾膜    (0.22 or 0.45 µm) 過濾, 或
        者離心去除。
        去除樣品或柱子中的氣泡  樣品純化過程中曲線不穩(wěn)樣品或 buffer 中有氣泡去除樣品或柱子中的氣泡
        去除樣品或柱子中的氣泡  樣品純化過程中曲線不穩(wěn)樣品或 buffer 中有氣泡樣品和 buffer 進行脫氣
        洗脫組分中沒有目的蛋白 樣品中抗體濃度太低使用其抗原做配體的介質(zhì)
         抗體被降解適當?shù)奶岣呦疵?pH
        回收率逐漸減低上樣量太多 減少上樣量
        回收率逐漸減低柱子太臟,載量降低按照填料清洗部分進行樹脂清洗

         

        親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)訂購說明:

        1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
        2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
        3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。 
        4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
        5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


        運輸說明:

        1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
        2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
        3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。

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