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        • 親和層析填料 鎳-瓊脂糖凝膠 H.P
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        • 親和層析填料 鎳-瓊脂糖凝膠 H.P
        產(chǎn)品名稱:

        親和層析填料 鎳-瓊脂糖凝膠 H.P

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-20
        親和層析填料 鎳-瓊脂糖凝膠 H.P
        貨號:S9320
        規(guī)格: 25ml
        鎳-瓊脂糖凝膠 H.P是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑,所以將這類物質(zhì)偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上,可以從各種來源的樣品中一步純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶

        親和層析填料 鎳-瓊脂糖凝膠 H.P
        貨號 :S9320
        規(guī)格 :25mL


        產(chǎn)品 簡介 :
            苯甲脒類物質(zhì)是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑,所以將這類物質(zhì)偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上,可以從各種來源的樣品中一步純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。
            苯甲脒瓊脂糖凝膠由于應(yīng)用新的活化方法所以流速高, 非特異吸附少, 而且填料粒度均勻,所以分離效果好,是純化絲氨酸蛋白酶類適合的填料。


        親和填料 特征 :

        特點(diǎn)載量大,分辨率好,流速高,使用方便。
        基質(zhì) 4%的交聯(lián)瓊脂糖凝膠
        配基苯甲脒
        配基密度7µmol /ml
        吸附載量 13 mg胰蛋白酶/ml
        填料的顆粒大小45-165µm
        大流速300cm/h
        pH范圍 3-10,在位清洗時pH范圍可到2-11
        保存溫度+4~8℃
        保存液體20%乙醇


        適用范圍 : 
            一步從各種樣品中純化絲氨酸蛋白酶類物質(zhì)。


        應(yīng)用實例: 
           實驗名稱:苯甲脒瓊脂糖凝膠 FF分離尿激酶。


        實驗步驟:
           (1)苯甲脒瓊脂糖凝膠 FF裝柱,1.6×20m,柱床體積為10ml
           (2)用緩沖液1平衡2-5個床體積,流速為2ml/min
           (3)取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的緩沖液1中,用0.45µm的濾膜過濾,上樣,流速
        為1ml/min
           (4)用緩沖液1再洗2-5個床體積,流速為2ml/min
           (5)后緩沖液2進(jìn)行洗脫,流速為2ml/min,收集洗脫峰,用SDS-PAGE純化后的效果。
           (6)用純水洗5個柱床體積,然后分別用100mM,pH8.0Tris-HCl緩沖液含1M NaCl和100mM,pH4.0的醋酸緩沖液含1M NaCl交替洗滌3次,再用純水洗3個柱床體積,然后再用20%的乙醇流洗3個柱床體積,流速為2ml/min,柱子置于+4~8℃環(huán)境中保存。
           (7)色譜圖見圖1,SDS-PAGE結(jié)果見圖2。 緩沖液組成:
            緩沖液1:100mM pH7.4的PBS緩沖液;緩沖液2:100mM醋酸緩沖液,pH4.0。


        也可以用這個填料特異去除各種融合蛋白酶切后的絲氨酸蛋白酶,例如凝血酶以及胰蛋
        白酶類蛋白酶。例如去除凝血酶上樣緩沖液為:50mM pH7.4的PBS緩沖液含0.15M NaCl,洗脫緩沖液為:50mM pH7.4的PBS緩沖液含1M NaCl。


        SDS-PAGE流程:
           (1)BSA法測量樣品蛋白濃度;
           (2)根據(jù)測定樣品的蛋白濃度,算出5-10µg/孔所需的體積;
           (3)向1.5ml EP管中加入含5-10µg蛋白的樣品溶液,若體積小于10µL,則加20mM PBS
        pH7.4補(bǔ)足10µl;若體積大于10µl,則要加入1ml無水乙醇,-20℃下濃縮1h;
           (4)取濃縮樣品10000rpm離心15min,除去上清,37℃烘箱10min去除殘余的乙醇;
           (5)在樣品加入20mM PBS pH7.4和2×loading buffer各10µl,100℃下10min。取出后用冷卻30s,4000rpm離心1s;
           (6)點(diǎn)樣,電泳。


        應(yīng)用的注意事項 :
           1  色譜柱裝填
           1、所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣,液體好做脫氣處理。
           2、在柱子下端加入蒸餾水,以除去柱子中的空氣,關(guān)閉柱子出口,在柱內(nèi)保留少量的
        蒸餾水。
           3、將瓊脂糖凝膠連續(xù)倒入柱子時,要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流,以減少氣泡的產(chǎn)
        生,讓填料先自然沉降。
           4、柱壓不超過0.3MPa,如果裝柱系統(tǒng)中無法測柱壓,則控制流速高于300cm/h,但是在
        使用中一般只用大流速的75%。
           2  蛋白的結(jié)合
        平衡緩沖液可以采用如下配方:100mM pH7.4的PBS緩沖液,0.1M NaCl,pH8.0。上樣完
        畢后,繼續(xù)用平衡緩沖液洗柱子,直到基線平穩(wěn)。
           3  蛋白的洗脫
          (1)洗脫可以采取特異性或者非特異性洗脫。
          (2)特異性洗脫可以用目標(biāo)分子的競爭劑,對氨基苯甲脒的抑制劑。對非特異性洗脫
        而言,可以選用以下幾種方法:
           a 改變離子強(qiáng)度,通常加入1M的NaCl,必要的話可以采用階段洗脫或線性梯度洗脫。
           b 改變pH,可采用階段洗脫洗脫或線性梯度洗脫來達(dá)到目的。
           c 降低洗脫緩沖液的極性。如可以在洗脫緩沖液中加入10%的二氧六環(huán)等。
           d 使用變性劑。如在洗脫緩沖液中加入尿素、鹽酸胍等。


        再生、清洗: 
        1  再生
           用純水洗5個柱床體積,然后分別用100mM,pH8.0Tris-HCl緩沖液含1M NaCl和
        100mM,pH4.0的醋酸緩沖液含1M NaCl交替洗滌3次,再用水洗3個柱床體積,然后再用20%的乙醇流洗3個柱床體積,流速為2ml/min,柱子置于+4~8℃環(huán)境中。
           如果在色譜操作過程中用到了變性劑或者去污劑,也可以用上述方法洗柱子。
        2  清洗
           在應(yīng)用中,柱子上結(jié)合的一些物質(zhì)如變性蛋白和脂質(zhì)等不能通過再生過程去除,這種
        情況下,可以用去污劑如0.1%Triton X-100在37℃洗柱子1min。之后立即用5個床體積的平衡液洗柱子。


        保存: 
            在20%乙醇中,4℃下長期保存。


        特別注意 :
            上樣之前 , 樣品必須去除色素 , 否則色素會被吸附到填料上 , 影響填料的正常使用

         

        親和層析填料 鎳-瓊脂糖凝膠 H.P訂購說明:

        1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
        2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
        3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
        4、每日訂單截止時間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
        5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


        運(yùn)輸說明:

        1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護(hù)航。
        2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護(hù)航。
        3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。

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