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        • 丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-21
        中文名稱
        丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒 微量法
        單位

        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        英文名稱
        Butyrylcholinesterase Activity Assay
        檢測方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5975
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途丁酰膽*酯酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)

        丁酰膽*酯酶(BchE)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5975

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體125 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體12mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前加入12mL試劑一,充分溶解,-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明:

        丁酰膽*酯酶(Butyrylcholinesterase,BchE,EC3.1.1.8),又稱血漿膽*酯酶,假性膽*酯酶,是一種*酸水解酶,由肝臟合成后進入血液,幾乎存在于所有動物組織中。BchE結(jié)構(gòu)與乙酰膽*酯酶(AchE)相似,但底物特異性和抑制劑敏感性不同。與AchE相比,BchE能夠有效水解較大的膽*酯,如丁酰膽*和苯甲酰膽*,而且可以清除有機磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用。有研究表明,BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點。

        BchE催化丁酰膽*水解生成膽*,膽*與二硫?qū)ο趸郊姿幔?/span>DTNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB412nm處有吸收峰,通過測定412nm吸光度增加速率,計算BchE活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL=15~10比例加入試劑一(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL試劑一),冰浴勻漿后,于4℃,12000rpm離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        2. 血清/血漿等液體樣本:直接測定。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測。

        3. 細(xì)菌、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量104個:試劑一體積(mL500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1 mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3s,間隔7s,總時間3 min),于4℃,12000rpm離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        二、 測定步驟

         

        1.可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至412nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2.操作表:(在微量玻璃比色皿/96孔板中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        空白管

        樣本

        10

        -

        蒸餾水

        -

        10

        試劑二

        100

        100

        試劑三

        100

        100

        立即充分混勻后于412nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱5min(酶標(biāo)儀有控溫功能可將溫度調(diào)至37℃),拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2。計算ΔA測定=A測定2-A測定1,ΔA空白=A空白2-A空白1,ΔA=ΔA測定-ΔA空白。空白管只需測定1-2次。

        三、BchE活性計算

        A、用微量玻璃比色皿測定:

        1. 按照蛋白濃度計算

        活性單位定義:每mg蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB1個酶活單位。

        BchE活性(U/mg prot)=[Δε×d×V反總×109] ÷Cpr×V樣)÷T×F=308.8×ΔA÷Cpr×F。

        2. 按照樣本質(zhì)量計算

        活性單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB1個酶活單位。

        BchE活性(U/g 質(zhì)量)=[ΔA÷ε×d×V反總×109W×V÷V樣總)÷T×F=308.8×ΔA÷W×F。

        3. 按照血清/血漿等液體體積計算

        活性單位定義:每mL血清/血漿每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB1個酶活單位。

        BchE活性(U/mL)=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷V÷T×F=308.8×ΔA×F。

        4. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算

        活性單位定義:每萬個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB1個酶活單位。

        BchE活性(U/104 cell)=[ΔA÷ε×d×V反總×109N×V÷V樣總)÷T×F=308.8×ΔA÷N×F

        εTNB摩爾消光系數(shù),13.6×103L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.21mL=2.1×10-4L;109:單位換算系數(shù),1mol=1×109nmolV樣:反應(yīng)體系加入樣本體積,0.01mL;V樣總:加入試劑一體積,1mLCpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,5min;F:樣本稀釋倍數(shù);N:細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量,以萬計。

        B、用96孔板測定:

        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm進行計算即可。

        注意事項:

        1. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,請嚴(yán)格控制反應(yīng)時間,建議兩人進行實驗,一人加樣,一人計時。

        2. 如果?A測定接近?A空白,可以增加樣本量后再進行測定;如果A2測定大于1ΔA測定大于0.7,建議將樣本上清用試劑一適當(dāng)稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1. 0.1018g大鼠肝臟樣本,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿,離心后上清液用試劑一稀釋2倍,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定2-A測定1=0.636-0.417=0.219ΔA空白=A空白2-A空白1=0.188- 0.180= 0.008,ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.211,按樣本質(zhì)量計算得(光徑為0.6cm帶入計算):

        BchE活性(U/g 質(zhì)量)=[ΔA÷ε×d×V反總×109W×V÷V樣總)÷T×F =2133.49 U/g 質(zhì)量。

        2. 取人血清樣本,用試劑一稀釋16倍,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定2-A測定1=0.960- 0.299=0.661,ΔA空白=A空白2-A空白1=0.188- 0.180=0.008ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.653,按液體體積計算得(光徑為0.6cm帶入計算):

        BchE活性(U/mL=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷V÷T×F =5377.237 U/mL

        參考文獻:

        [1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity [J]. Biochemical Pharmacology, 1961, 7(2): 88-95.

        [2] Yücel YY, Tacal O, Ozer I. Comparative effects of cationic triarylmethane, phenoxazine and phenothiazine dyes on horse serum butyrylcholinesterase [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2008, 478(2): 201-205.

        [3] Jońca J, ?uk M, Was?g B. et al. New Insights into Butyrylcholinesterase Activity Assay: Serum Dilution Factor as a Crucial Parameter [J]. PLoS ONE, 2015, 10(10).

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0840/BC0845  羧酸酯酶(CarE)活性檢測試劑盒

        BC2020/BC2025 乙酰膽*酯酶(AchE)活性檢測試劑盒

        BC2130/BC2135  組織及血液酸性磷酸酶(ACP)活性檢測試劑盒

        BC2140/BC2145  組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒

        丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒 微量法 丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒 微量法

         

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