γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào): BC1220
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一工作液（在試劑一瓶中配制）：臨用前配制，把10mL試劑二倒入試劑一瓶中，充分溶解（室溫過低時(shí)可以40℃水浴促進(jìn)溶解）。2-8℃可以保存4周

2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)樣本量按試劑一工作液：試劑三=960μL：3.54mL（共4.5mL，約6T）的比例進(jìn)行配制，限當(dāng)天用完。

產(chǎn)品說明：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?；D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產(chǎn)生*氨酸鹽，在細(xì)胞外谷*甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰*中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰*氨酸，生成*，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm光吸收增加速率，來計(jì)算γ-GT酶活性。


注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：
培養(yǎng)細(xì)胞中γ-GT活性測定時(shí)，細(xì)胞中γ-GT的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞（防止因?yàn)榈鞍踪|(zhì)變性導(dǎo)致酶失活）。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g腎臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液稀釋20倍按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA =（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（1.412-0.68）-（0.597-0.578）=0.713，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：γ-GT（U/g 質(zhì)量）=0.506×ΔA÷W×20（稀釋倍數(shù)）=72.16 U/g 質(zhì)量。

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