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        • 6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-21
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法
        單位

        英文名稱
        Glucose-6-Phosphate(P6G)Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5965
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        動物組織6-磷酸葡萄糖(G6P)含量檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5965

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取

        液體110mL×1

        2-8℃保存

        試劑一A

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑一B

        液體25mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        -20℃保存

        標準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前將試劑一A全部溶于試劑一B,充分溶解后使用,未用完的試劑2-8℃保存4(試劑顏色由透明變至淡黃色為正?,F(xiàn)象,可正常使用),禁止放-20℃保存

        2、 試劑二:臨用前加入0.5mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20℃分裝保存4,避免反復凍融。

        3、 試劑三:臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20℃分裝保存4,避免反復凍融(該試劑為凍干試劑,可能存在肉眼觀察不同瓶內(nèi)試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象,此現(xiàn)象不影響使用,實際質(zhì)量相同

        4、 試劑三工作液:臨用前根據(jù)樣本量按試劑三:蒸餾水=3μL12μL(共15μL,約4T)的比例配制后使用,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        5、 標準品:臨用前加入1.645mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖標準品,2-8℃保存4周。

        6、 0.5μmol/mL標準品配制:取25μL 20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖標準品,加975μL蒸餾水充分溶解成0.5μmol/mL 標準品進行測定,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        7、 工作液:臨用前根據(jù)樣本量按試劑一:試劑二:試劑三工作液=870μL15μL15μL(共900μL,約4T)配成工作液后使用,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        產(chǎn)品說明:

        6-磷酸葡萄糖(Glucose-6-Phosphate,G6P),又稱葡萄糖-6-磷酸,是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物,廣泛存在于動植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續(xù)糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其第一個底物,該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外,葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被儲存起來。

        6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化G-6-PNADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,在340nm處有吸收峰,據(jù)此可以計算6-磷酸葡萄糖的含量。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。

        需自備的儀器和用品

        紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96UV板、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

        組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積mL15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于沸水浴煮5min(用封口膜封口,防止爆蓋,冷卻至室溫后于4℃ 12000g離心10min,取上清置冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

        2、 工作液37℃預熱5min。

        3、 樣本測定(在96UV/微量石英比色皿中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        標準管

        空白管

        樣本

        75

        -

        -

        標準品

        -

        75

        -

        蒸餾水

        -

        -

        75

        工作液

        225

        225

        225

        充分混勻,立即測定340nm10s時的吸光度A1,然后迅速置于37℃反應10min,測定10min10s時的吸光度A2,分別記為A1測定、A2測定、A1標準、A2標準、A1空白、A2空白。計算ΔA標準=A2標準-A1標準)-A2空白-A1空白),ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)。標準管和空白管只需測1-2次。

        三、6-磷酸葡萄糖含量計算公式

        1. 按樣本蛋白濃度計算:

        G6P含量μmol/g prot=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準×V提取÷Cpr×V提取×F

        =0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F

        2. 按樣本質(zhì)量計算:

        G6P含量μmol/g 質(zhì)量)=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V提取÷W×F

        =0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F

        C標準:標準點濃度,0.5μmol/mLV提?。杭尤胩崛∫旱捏w積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;F:稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1. 最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。

        2. 若樣本ΔA<0.01,可適當增大樣本量后測定;若樣本ΔA>1.0A測定>1.5,可用蒸餾水稀釋上清液后測定,

        注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。

        實驗實例:

         

        1、 0.102g大鼠肝臟加入提取液進行冰浴勻漿,取上清后按照測定步驟操作,用96UV板測得ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)=0.281-0.177-0.045-0.045=0.104ΔA標準=A2標準-A1標準)-A2空白-A1空白)=0.470-0.074-0.045-0.045=0.396,按樣本質(zhì)量計算6-磷酸葡萄糖含量得:

        G6P含量μmol/g 質(zhì)量)=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =1.287 μmol/g 質(zhì)量。

        2、 0.103g大鼠肺加入提取液進行冰浴勻漿,取上清后按照測定步驟操作,用96UV板測得ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)=0.179-0.113-0.045-0.045=0.066ΔA標準=A2標準-A1標準)-A2空白-A1空白)=0.470-0.074-0.045-0.045=0.396,按樣本質(zhì)量計算6-磷酸葡萄糖含量得:

        G6P含量μmol/g 質(zhì)量)=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.809 μmol/g 質(zhì)量。

        參考文獻:

        [1] Belford J, Feinleib M R .The increase in glucose-6-phosphate content of the heart after the administration of inotropic catecholamines, calcium, and aminophylline[J].Biochemical Pharmacology, 1962, 11(11):987-994.

        [2] Ashcroft S , Capito K , Hedeskov C .Time course studies of glucose-induced changes in glucose-6-phosphate and fructose-1, 6-diphosphate content of mouse and rat pancreatic islets[J].Diabetologia, 1973, 9(4):299-302.

        相關系列產(chǎn)品:

        BC0260/BC0265  6-磷酸葡萄糖脫氫酶G6PDH)活性檢測試劑盒

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        6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法 6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法

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