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        • 丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-21
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        單位

        英文名稱
        Butyrylcholinesterase Inhibitor Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5985
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        貨號(hào):BC5985

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體120 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑二

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體12 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑五

        液體1 mL×1

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前加入1.2mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑-20℃分裝后可保存4周,避免反復(fù)凍融該試劑為凍干試劑,可能存在不同瓶間肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象,此現(xiàn)象不影響使用,實(shí)際質(zhì)量相同。

        2. 試劑四:臨用前加入6mL試劑二,充分溶解,用不完的試劑-20℃可分裝保存4周,避免反復(fù)凍融。

        3. 試劑五:10mmol/L利凡斯的明溶液。臨用前取15μL 10mmol/L利凡斯的明溶液,加入985μL蒸餾水,配制成0.15mmol/L利凡斯的明溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配(此試劑用于陽(yáng)性管實(shí)驗(yàn),選做)。

        產(chǎn)品說明:

        丁酰膽*酯酶(Butyrylcholinesterase,BchE,EC3.1.1.8),又稱血漿*堿酯酶,假性膽*酯酶,是一種絲*酸水解酶,由肝臟合成后進(jìn)入血液,幾乎存在于所有動(dòng)物組織中。與乙酰膽*酯酶(AchE)相比,BchE能夠有效水解較大的膽*酯,如丁酰膽*和苯甲酰膽*,而且可以清除有機(jī)磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用。有研究表明,BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點(diǎn),BchE抑制劑被用于改善阿爾茨海默病患者記憶力減退、認(rèn)知功能障礙等病征。

        BchE催化丁酰膽*水解生成*堿,膽*與二硫代硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB),BchE抑制劑通過抑制BchE活性,減少丁酰膽*的水解。TNB412nm處有吸收峰,可通過測(cè)定412nm處吸光度的變化,計(jì)算BchE抑制劑活性。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、烘箱、粉碎儀/研缽/勻漿器、30-50目篩、超聲清洗儀、離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

         

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織樣本:將樣本烘干至恒重,粉碎,過30-50目篩之后,稱取約0.1g,加入1mL提取液,用超聲提取法進(jìn)行提取,超聲功率300W60℃,提取30min12000rpm,25℃,離心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待測(cè)。

        2. 粉劑樣本:稱取適量樣本,加入適量提取液,配制成適宜濃度的溶液待測(cè)。

        注:若粉劑樣本不溶于提取液,可先用合適的溶劑溶解,配制成100×或者更大濃度的溶液,再用提取液稀釋至濃度。

        二、 測(cè)定步驟

        1.可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2.操作表:(在微量玻璃比色皿/96孔板中加入下列試劑)

        試劑名稱(µL

        空白管1

        空白管2

        測(cè)定管

        陽(yáng)性管(選做

        試劑一

        10

        -

        10

        10

        試劑二

        50

        60

        50

        50

        提取液

        10

        10

        -

        -

        樣本

        -

        -

        10

        -

        試劑五

        -

        -

        -

        10

        混勻,25℃避光孵育10min

        試劑三

        100

        100

        100

        100

        試劑四

        50

        50

        50

        50

        充分混勻,于412nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A,迅速置于37準(zhǔn)確反應(yīng)5min(若酶標(biāo)儀帶有控溫功能,將溫度調(diào)至37℃),測(cè)定5min10s時(shí)的吸光值A’,分別記為A空白1、A空白2、A測(cè)定A陽(yáng)性A’空白1、A’空白2A’測(cè)定、A’陽(yáng)性,計(jì)算ΔA空白=A’空白1-A空白1-A’空白2-A空白2),ΔA測(cè)定=A’測(cè)定-A測(cè)定-A’空白2-A空白2),ΔA陽(yáng)性=A’陽(yáng)性-A陽(yáng)性-A’空白2-A空白2)??瞻坠?/span>1和空白管2只需做1-2次。

        三、丁酰膽*酯酶抑制劑活性計(jì)算

        1. 抑制率計(jì)算

        丁酰膽*酯酶抑制劑

        抑制率(%=ΔA空白-ΔA測(cè)定÷ΔA空白×100%。

        2. IC50計(jì)算

        IC50,即抑制劑半抑制濃度。對(duì)于確定對(duì)BchE有抑制作用的樣本,可配制成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻?,分別以樣本濃度為橫坐標(biāo),以抑制率為縱坐標(biāo)作抑制曲線,以此計(jì)算得到抑制率為50%時(shí)的樣本濃度,即IC50

        注意事項(xiàng):

        1. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,請(qǐng)嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間和操作時(shí)間。

        2. 樣本吸光度大于1.6ΔA測(cè)定接近ΔA空白時(shí),建議在樣本處理步驟增加組織樣本比例或?qū)⒎蹌颖九渲瞥筛邼舛鹊娜芤涸龠M(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA測(cè)定小于0.004時(shí),可以將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

        3. 若用于比較不同試劑、提取物、藥物或組織對(duì)BchE的抑制程度,必須將試劑、提取物、藥物或組織勻漿配制成相同濃度進(jìn)行比較。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1005g柚果皮樣本(烘干),加入1mL提取液進(jìn)行超聲提取,離心后取上清,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA空白=A’空白1-A空白1-A’空白2-A空白2=1.129-0.133-0.141-0.120=0.975,ΔA測(cè)定=A’測(cè)定-A測(cè)定-A’空白2-A空白2=0.878-0.337-0.141-0.120=0.520計(jì)算抑制率得:

        BchE抑制劑抑制率(%=0.975-0.520÷0.975×100%=46.667%。

        2. 0.1014g柿果皮樣本(烘干),加入1mL提取液進(jìn)行超聲提取,離心后取上清,稀釋16倍后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA空白=A’空白1-A空白1-A’空白2-A空白2=1.129-0.133-0.141-0.120=0.975ΔA測(cè)定=A’測(cè)定-A測(cè)定-A’空白2-A空白2=0.581-0.127-0.141-0.120=0.433,計(jì)算抑制率得:

        BchE抑制劑抑制率(%=0.975-0.433÷0.975×100%=55.590%

        3. 10μL 0.15mmol/L利凡斯的明溶液,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA空白=A’空白1-A空白1-A’空白2-A空白2=1.129-0.133-0.141-0.120=0.975,ΔA測(cè)定=A’測(cè)定-A測(cè)定-A’空白2-A空白2=0.631-0.126-0.141-0.120=0.484計(jì)算抑制率得:

        BchE抑制劑抑制率(%=0.975-0.484÷0.975×100%=50.359%。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity [J]. Biochemical Pharmacology, 1961, 7(2): 88-95.

        [2] Noor Atatreh, Sara Al Rawashdah, Shaikha S Al Neyadi. et al. Discovery of new butyrylcholinesterase inhibitors via structure-based virtual screening [J]. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2019, 34(1): 1373-1379.

        [3] Li Q, Chen Y, Xing S. et al. Highly Potent and Selective Butyrylcholinesterase Inhibitors for Cognitive Improvement and Neuroprotection [J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2021, 64(10): 6856-6876.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0840/BC0845  羧酸酯酶(CarE)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2020/BC2025 乙酰膽*酯酶(AchE)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2130/BC2135  組織及血液酸性磷酸酶(ACP)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2140/BC2145  組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測(cè)試劑盒

        BC5970/BC5975 丁酰膽*酯酶(BchE)活性檢測(cè)試劑盒

         

        丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)試劑盒 微量法 丁酰膽*酯酶抑制劑活性檢測(cè)試劑盒 微量法

         

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