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        • NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測(cè)試盒 常量
        產(chǎn)品名稱:

        NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測(cè)試盒 常量

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-21
        NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測(cè)試盒 常量
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        NADPH-cytochrome C Reductase(NCR)Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2720
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測(cè)試應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        NADPH-細(xì)*色素C還原酶(NCR)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        可見(jiàn)分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào)BC2720

        規(guī)格50T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑二

        液體80mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×2

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前取一瓶加入50mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃保存可保存4周;

        2、 試劑三:臨用前取一瓶加入1.3mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融。

        3、 試劑四:臨用前取一支加入275μL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說(shuō)明

        細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。NCR作為P450酶系的重要一員,催化氧化型P450還原再生。

        NCR催化NADPH還原氧化型細(xì)*色素C,還原型細(xì)*色素C550nm處有特征吸收峰;通過(guò)測(cè)定550nm吸光度的增加速率,來(lái)計(jì)算NCR活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品

        可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、低溫離心機(jī)、超速離心機(jī)、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、粗酶液提取(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預(yù)冷的1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g,4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

        2、粗制微粒體4℃100 000g,離心60min,棄上清液。

        3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

        4、最終微粒體:向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,置于冰上待測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至550nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量取出部分試劑二37℃水浴中預(yù)熱30min。

         

        3、空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL蒸餾水、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化,測(cè)定第10s和第130s吸光值,分別記為A1A2。計(jì)算ΔA空白=A2-A1空白管只需做1-2次。

        4、測(cè)定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL粗酶液、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化,測(cè)定第10s和第130s吸光值,分別記為A3、A4。計(jì)算ΔA測(cè)定=A4-A3

        三、NCR活性計(jì)算

        1、按蛋白濃度計(jì)算

        活性單位定義:37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol還原型細(xì)*色素C1個(gè)酶活單位。

        NCR (U/mg prot)= (ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總÷Cpr×V樣)÷T

        = 0.529×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷Cpr

        2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

        活性單位定義:37℃條件下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol還原型細(xì)*色素C1個(gè)酶活單位。

        NCR (U/g 質(zhì)量)= (ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總÷(V÷V樣總×W)÷T

        =0.265×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷W

        ε:還原型細(xì)*色素C摩爾消光系數(shù),19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1010μL=0.00101L;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測(cè)定;V樣:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積,50μL=0.05mL;V樣總:樣本處理中最后加入試劑二體積,0.5mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,2min。

        注意事項(xiàng)

        1、如果測(cè)定吸光值A1.2ΔA0.8,建議稀釋樣本后再測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2、如果測(cè)定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定,注意同步修改計(jì)算公式。

         NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測(cè)試盒 常量 NADPH-細(xì)*色素C還原酶活性測(cè)試盒 常量


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