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        您的位置: 網(wǎng)站首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 生化檢測(cè)試劑盒-常量法 > 輔酶Ⅰ系列 > BC0440二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶
        • 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶
        • 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶
        產(chǎn)品名稱:

        二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-21
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S ; 25T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC0440
        規(guī)格25T/24S 50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
        紫外分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
        貨號(hào):BC0440
        規(guī)格:25T/24S、50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱/規(guī)格 25T50T保存條件
        提取液液體25 mL×1瓶液體50 mL×1瓶4℃保存
        試劑一液體25 mL×1瓶液體50 mL×1瓶4℃保存
        試劑二粉劑×1粉劑×1-20℃保存
        試劑三粉劑×2粉劑×2-20℃保存
        試劑四粉劑×1粉劑×1-20℃保存

        25T溶液的配制:

        1. 試劑三:臨用前1加入0.5mL蒸餾水充分溶解待用,振蕩溶解后若出現(xiàn)渾濁可以離心使用;

        2. 試劑四:臨用前加入1mL 蒸餾水充分溶解待用;

        3. 工作液的配制:臨用前在試劑二中加入全部試劑一,充分混勻,在25℃孵育5min。

        50T溶液的配制:
        1試劑三:臨用前1加入1 mL蒸餾水充分溶解待用,振蕩溶解后若出現(xiàn)渾濁可以離心使用;
        2、試劑四:臨用前加入2 mL 蒸餾水充分溶解待用;
        3、工作液的配制:臨用前在試劑二中加入全部試劑一,充分混勻,在25℃孵育5min。
        產(chǎn)品說(shuō)明:
        1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubisco, EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶,既控制著CO2的固定,同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流,其活性的大小直接影響著光合速率。在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結(jié)合,產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA);PGA可通過(guò)外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用,產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸,伴隨著NADH氧化生成NAD+;在340nm NADH有特征吸收峰,而NAD+沒(méi)有此吸收峰,因此測(cè)定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        自備的儀器和用品
        紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟:

        • 處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1、細(xì)菌或細(xì)胞樣本的制備:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
        2、稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。建議選取新鮮的植物樣本。

        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 按下表步驟加樣:

        試劑名稱測(cè)定管空白管
        樣本(μL100-
        蒸餾水(μL-100
        試劑三(μL3535
        試劑四(μL3535
        工作液(μL900900

        記錄340nm處20s時(shí)吸光值A15min20s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定=A1測(cè)定-A2測(cè)定。ΔA空白=A1空白-A2空白;ΔA =ΔA測(cè)定-ΔA空白。反應(yīng)溫度保持在25℃。(空白管只做1-2管
        三、Rubisco活性計(jì)算

        1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol NADH為一個(gè)酶活力單位。
        Rubisco活力(U/mg prot=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(Cpr×V樣) ÷T =344×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:25℃中每 g組織每分鐘氧化1 nmol NADH為一個(gè)酶活力單位。
        Rubisco活力(U/g 質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=344×ΔA÷W

        1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        單位的定義:25℃中每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘氧化1 nmol NADH為一個(gè)酶活力單位。
        Rubisco活力(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=0.69×ΔA
        V反總:反應(yīng)體系總體積,1.07×10-3L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5min;W樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn);109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。
        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g植物葉片,加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.279-1.206=0.073,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.834-0.823=0.011ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.073-0.011=0.062,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:Rubisco活力(U/g 質(zhì)量)=344×ΔA÷W=344×0.062÷0.1=213.28 U/g 質(zhì)量

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0310/BC0315 輔酶Ⅰ NAD(H)含量檢測(cè)試劑盒
        BC1030/BC1035 NAD激酶NADK活性檢測(cè)試劑盒
        BC0630/BC0635 NADH氧化酶NOX活性檢測(cè)試劑盒
        BC1130/BC1135 NAD-蘋果酸酶NAD-ME活性檢測(cè)試劑盒

        二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶測(cè)試盒 輔酶

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