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        • 糖原磷酸化酶a(GPa)檢測試劑盒 糖原
        產(chǎn)品名稱:

        糖原磷酸化酶a(GPa)檢測試劑盒 糖原

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-21
        儲存條件
        -20℃
        糖原磷酸化酶a(GPa)檢測試劑盒 糖原
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Glycogen Phosphorylase a (Gpa) Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC3340
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途糖原磷酸化酶a(GPa)檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        糖原磷酸化酶a (GPa)活性檢測試劑盒說明書

        紫外分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號:BC3340

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體50mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑五

        粉劑×3

        -20℃保存

        試劑六

        粉劑×3

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入1.25 mL蒸餾水,充分混勻;2-8℃保存2個月;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2、 

        3、 試劑三:臨用前加入1.25 mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        4、 試劑四:臨用前加入1.25mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        5、 試劑五:臨用前取一支加入1 mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        6、 試劑六:臨用前取一支加入1 mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        7、 工作液的配制:臨用前根據(jù)實驗所需用量,按照試劑一:試劑二:試劑三:試劑四:蒸餾水=740μL: 20μL: 20μL: 20μL: 50μL1T的量)的比例,充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關(guān)鍵酶,催化糖原的磷酸化反應(yīng)。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶aGlycogen phosphorylase a, GPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGlycogen phosphorylase b, GPb)兩種形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶a的催化下進行。未添加激活劑時,糖原磷酸化酶a催化糖原和無機磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH340nm下測定NADPH上升速率,即可反映糖原磷酸化酶a活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、電子天平、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、1 mL石英比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進行冰浴勻漿,然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

        2、細菌或者細胞:先收集細胞或細菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3、血清(漿):直接檢測。若有渾濁可以離心后取上清進行測定。

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至340 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 臨用前工作液置于37℃預(yù)熱5min。

        在石英比色皿中依次加入50 μL 樣本、50 μL試劑五、50 μL試劑六、850 μL工作液,充分混勻10s,記錄340nm10s時吸光值A1,37℃水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)10min,反應(yīng)后拿出迅速擦干測定10min10s時吸光值A2計算ΔA = A2- A1。

        三、 糖原磷酸化酶a (GPa)活性計算

        1. 樣本蛋白濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

        GPaU/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

        2. 按樣本鮮重計算

        單位定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

        GPaU/g 質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷W

        3. 按樣本體積計算

        單位定義:每mL液體每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位

        GPaU/mL=[ΔA×V反總÷ε×d×109] ÷V÷T=321.54×ΔA

        4. 按細胞數(shù)量計算

        單位定義:每1萬個細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

        GPaU/104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109] ÷(細胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷細胞數(shù)量

        V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.05 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應(yīng)時間,10 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;細胞數(shù)量:以萬計;109換算單位,1mol=109 nmol。

        注意事項:

        1、如果測定吸光值ΔA0.8,建議稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加反應(yīng)中的樣本體積或者樣本質(zhì)量后再進行測定。

        實驗實例:

        1. 稱取0.1 g兔子肝臟組織,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,8000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測。按照測定步驟操作,計算ΔA=A2-A1=0.414-0.318=0.096,按公式計算活性:
        GPaU/g 質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=321.54×0.096÷0.1 =308.68 U/g 質(zhì)量

        糖原磷酸化酶a(GPa)檢測試劑盒 糖原 糖原磷酸化酶a(GPa)檢測試劑盒 糖原

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