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        • 焦磷酸化酶(UGP)檢測(cè)試劑盒 糖原
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        焦磷酸化酶(UGP)檢測(cè)試劑盒 糖原

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-21
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱(chēng)
        焦磷酸化酶(UGP)檢測(cè)試劑盒 糖原
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱(chēng)
        UDP-glucose pyrophosphosphprylase(UGP) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢(xún)
        分子式詳詢(xún)純度詳詢(xún)
        分子量詳詢(xún)貨號(hào)BC3360
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途焦磷酸化酶(UGP)檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        紫外分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào)BC3360

        規(guī)格50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體55 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑五

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前加30mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存4,禁止反復(fù)凍融。

        2. 試劑二:臨用前12.5 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑2-8℃保存2。

        3. 試劑三:臨用前10.7 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存4,禁止反復(fù)凍融。

        4. 試劑四:臨用前11 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存2,禁止反復(fù)凍融。

        5. 工作液的配制:將試劑一:試劑二:試劑三:試劑四:試劑五:試劑六按體積比=6001002040100250混合,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGPEC 2.7.7.9)在自然界廣泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和動(dòng)物中主要活化酶的形式,作為葡萄糖基供體參與糖原、蔗糖、纖維素等的合成代謝。

        UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH,UGP活性可以用340nm的吸光值的變化來(lái)反應(yīng)。  

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品

        紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

         

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        血清等液體:直接檢測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 操作表:

        試劑名稱(chēng)

        空白管

        測(cè)定管

        樣本(µL


        100

        工作液(µL

        900

        900

        蒸餾水(µL

        100

        -

        1mL石英比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于37水浴鍋或者培養(yǎng)箱反應(yīng)5min,拿出迅速擦干測(cè)定310s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管= A2測(cè)定-A1測(cè)定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

        三、UGP酶活計(jì)算

        1. 按照樣本蛋白濃度計(jì)算

        酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        UGPU/mg prot=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

        2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活單位定義:每克組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        UGPU/g 質(zhì)量)=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

        3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活單位定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        UGPU/104 cell=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=0.643×ΔA

        4. 按照液體體積計(jì)算

        酶活單位定義:每毫升液體每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        UGPU/mL=[ΔA÷ε×d×V反總×109]÷V÷T=321.54×ΔA

        V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mLT:反應(yīng)時(shí)間,5min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g ;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn);109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。

        注意事項(xiàng):

        1. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,變化不超過(guò)0.01

        2. ΔA大于0.6或者A2測(cè)定大于1.2時(shí),建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí),可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(5min10min)來(lái)測(cè)定。

        焦磷酸化酶(UGP)檢測(cè)試劑盒 糖原 焦磷酸化酶(UGP)檢測(cè)試劑盒 糖原

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