肌酸激酶（CK）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1140
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加10 mL蒸餾水溶解；用不完的分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

2. 試劑二：臨用前加入0.5 mL蒸餾水溶解；用不完的分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

3. 試劑三：臨用前取1支加入0.5 mL蒸餾水溶解；用不完的分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

4. 試劑四：臨用前加入0.65 mL蒸餾水溶解；用不完的分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

5. 工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑一、試劑二、試劑三、試劑四、試劑五以70:4:7:10:90的比例混合（體積比）?，F(xiàn)用現(xiàn)配。使用前室溫孵育20min（該步驟不可省略）。

產(chǎn)品說明：
肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） (EC 2.7.3.2)也成為肌酸磷酸激酶，主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)，是一個與細胞能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶。
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP⁺生成NADPH，導(dǎo)致340nm光吸收值增加，以此來表示CK酶活。




注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、恒溫水浴鍋、研缽/勻漿器、蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 血清的CK不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h。

2. 樣本蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

3. OD 值大于0.6可用提取液適當(dāng)稀釋樣本，并在計算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。

4. ΔA空白管一般不超過0.01。

實驗實例：

1. 取0.1g小鼠腦加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋4倍，之后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.638-0.149=0.489，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.489-0=0.489，按組織樣本質(zhì)量計算酶活得：CK活性（U/g 質(zhì)量）=268×ΔA÷W×4（稀釋倍數(shù)）=268×0.489÷0.1×4（稀釋倍數(shù)）=5242.08 U/g 質(zhì)量。

2. 取鴨血清200μL，按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.445-0.423=0.022，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.022-0=0.022，按血清體積計算酶活得：CK活性（U/mL）=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL。

相關(guān)發(fā)表文獻：

1. Defang Li, Ning Lu, Jichun Han,et al. Eriodictyol Attenuates Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through the Activation of JAK2. Frontiers in Immunology. January 2018;(IF3.845)

2. Xu Y, Meng X, Hou X, et al. A mutant of the Buthus martensii Karsch antitumor-analgesic peptide exhibits reduced inhibition to hNav1. 4 and hNav1. 5 channels while retaining analgesic activity[J].Journal of Biological Chemistry, 2017,  292(44): 18270-18280

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