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        產(chǎn)品目錄
        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品中心 > 生化檢測試劑盒-常量法 > 其它系列 > BC3140-50T/24S植酸酶活性檢測試劑盒 其它
        • 植酸酶活性檢測試劑盒 其它
        產(chǎn)品名稱:

        植酸酶活性檢測試劑盒 其它

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-21
        植酸酶活性檢測試劑盒 其它
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Phytase Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC3140
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途植酸酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        植酸酶活性檢測試劑盒

        可見分光光度法

        貨號:BC3140

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        緩沖液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前將試劑一加入到緩沖液中(可吸取緩沖液到試劑一瓶中反復(fù)沖洗),充分震蕩溶解,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        2. 試劑二:臨用前加入6.3mL蒸餾水充分溶解,再將槍頭伸入液面下緩慢加入1.7mL濃硫酸。2-8℃可保存4周。

        3. 試劑三:臨用前加入40mL蒸餾水充分溶解。2-8℃可保存4周。

        4. 工作液:臨用前根據(jù)測定數(shù)量將試劑二:試劑三=1mL5mL (10T)的比例混勻,配制后于2-8℃可保存3天。

        5. 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL無機磷標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:

        植酸酶(Phytase)又叫肌醇六磷酸酶,是一種蛋白質(zhì)和糖的結(jié)合酶,植酸酶可以分解植酸產(chǎn)生無機磷和肌醇,極大的提高生物對養(yǎng)分的利用率,天然植酸酶廣泛存在于植物、動物組織和微生物中,現(xiàn)多用微生物來合成植酸酶進(jìn)行生產(chǎn)應(yīng)用,植酸酶在糧食生產(chǎn)、畜牧養(yǎng)殖領(lǐng)域具有廣泛的研究價值。

        在一定的環(huán)境條件下,植酸酶可以分解植酸鈉(肌醇六磷酸十二鈉)產(chǎn)生無機磷和肌醇衍生物,在酸性條件下,無機磷和鉬酸銨顯色劑發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)色的鉬藍(lán)物質(zhì),其在700nm有特征吸收峰,通過測定無機磷的含量,可計算出植酸酶的活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、濃硫酸、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織:按照樣本質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿;4000g 4℃離心10min(若仍然渾濁,可延長離心時間),取上清置冰上待測。

        2. 細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液)加入提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲 3s,間隔 7s,總時間3min),4000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        3. 培養(yǎng)液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測定。

        二、測定步驟

        1. 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至700nm,用蒸餾水調(diào)零。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將5μmol/mL無機磷標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至2、1、0.50.25、0.125、0.0625、0.031250.0156μmol/mL備用。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋可參考下表

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        5

        400

        600

        2

        2

        2

        500

        500

        1

        3

        1

        500

        500

        0.5

        4

        0.5

        500

        500

        0.25

        5

        0.25

        500

        500

        0.125

        6

        0.125

        500

        500

        0.0625

        7

        0.0625

        500

        500

        0.03125

        8

        0.03125

        500

        500

        0.0156

        備注:實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需200µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3、在EP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL)

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        200

        200

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        200

        -

        37℃水浴5min

        -

        -

        試劑一

        480

        -

        -

        -

        37℃水浴30min,沸水浴10min

        -

        -

        試劑一

        -

        480

        -

        -

        蒸餾水

        -

        -

        480

        680

        工作液

        600

        600

        600

        600

             

        常溫反應(yīng)10min,常溫8000g,離心10min,吸取1mL上清,于700nm處測定吸光值,分別記為A測定、A對照A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。分別計算 ΔA=A測定-A對照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白(標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做 1-2 次,每個測定管需設(shè)置一個對照管)。

        二、植酸酶活性的計算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔAy,ΔA)代入公式計算樣本濃度(xμmol/mL)。

        2. 植酸酶活性計算

        1)按樣本蛋白質(zhì)濃度計算

        單位定義:在37,pH5.5環(huán)境下,mg組織蛋白每分鐘在反應(yīng)體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/mg prot= x×V樣總÷Cpr×V樣總÷T= x÷Cpr÷30

        2)按樣本質(zhì)量計算

        單位定義:在37,pH5.5環(huán)境下,g組織每分鐘在反應(yīng)體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x×V樣總÷W÷T = x÷W÷30

        3)按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算

        單位定義:在37pH5.5環(huán)境下,104個細(xì)胞每分鐘在反應(yīng)體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/104 cell=  x×V樣總÷N÷T = x÷N÷30

        4)按照液體樣本體積計算

        單位定義:在37pH5.5環(huán)境下,mL樣本每分鐘在反應(yīng)體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        植酸酶活性(U/mL= x×V÷V÷T=x÷30

        V樣:加入樣本體積,0.2mL;V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,30min;N細(xì)胞數(shù)量以萬計。

        注意事項:

        1. 為防止沸水浴10min過程中水分散失,建議使用螺旋口EP管或用封口膜給EP管纏口。

        2. 如果測定吸光值過低或接近空白,適當(dāng)延長第二步的37℃水浴反應(yīng)時間或加大樣本量后,重新測定。如果A測定大于1.5或者ΔA超過檢測范圍,建議將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。

        3. 結(jié)果于40min內(nèi)測定完畢。

        實驗實例:

        0.15g菠菜種子(已發(fā)芽),按照測定步驟操作,測得計算A測定 = 1.327A對照 = 1.054,?A= 0.273,將?A代入標(biāo)曲公式y = 0.4892x + 0.0313,得出x= 0.49,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        植酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= 0.1098 U/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Senna R , Simonin V , Silva-Neto M A C , et al. Induction of acid phosphatase activity during germination of maize (Zea mays) seeds[J]. Plant Physiology & Biochemistry, 2006, 44(7-9):467-473.

        [2] Iqbal T H , Lewis K O , Cooper B T . Phytase activity in the human and rat small intestine[J]. Gut, 1994, 35(9):1233-1236.

        [3] Azeke M A , Egielewa S J , Ihimire E . Effect of germination on the phytase activity, phytate and total phosphorus contents of rice (Oryza sativa), maize (Zea mays), millet (Panicum miliaceum), sorghum (Sorghum bicolor) and wheat (Triticum aestivum)[J]. Journal of Food Science&Technology, 2011.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC3610/BC3615  堿性木聚糖酶(BAX)活性檢測試劑盒

        BC2540/BC2545  纖維素酶(CL)活性檢測試劑盒

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        BC0610/BC0615  α-淀*酶活性檢測試劑盒

         

        植酸酶活性檢測試劑盒 其它 植酸酶活性檢測試劑盒 其它

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