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        • 人白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        人白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2022-08-16
        Solarbio ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。人白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒是將抗人IL-12P40單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上;分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本;洗板后加入生物素化抗人IL-12P40 抗體;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD),通過計算出樣本中人IL-12P40 的濃度。?

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶貨號SEKH-0020
        規(guī)格96T供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途人IL-12P40含量測定應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
        人白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒注意事項:

        1.試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
        2.試劑盒未使用時應(yīng)保存在2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
        3.試劑盒使用前請在室溫恢復(fù)30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
        4.在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
        5.為避免交叉污染,請在試驗中使用1次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。.
        6.濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 蓋上,使用前請離心處理(5-10 S即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。

         

        7.除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
         

        8.為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        安全提示:
        試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護(hù);在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實驗室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

         

        自備實驗器材(不提供,可代購)


        1.酶標(biāo)儀(主波長450nm,參考波長630nm)
        2.高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
        3.洗板機(jī)或洗瓶
        4.37℃孵育箱
        5.雙蒸水,去離子水,量筒等
        6.稀釋用聚丙烯試管


         

        人白細(xì)胞介素12p40樣本收集及儲存:
        1.細(xì)胞培養(yǎng)上清:
        將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在4℃條件下1000 ×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
        2.血清樣本:
        室溫血液自然凝固20 min后,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復(fù)凍融。
        3.血漿樣本:
        將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合20 min,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。

        ※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值,請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù)。

         

        試劑準(zhǔn)備:
        1.試劑回溫:首先在實驗前30 min將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。


        2.配制洗滌液:預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。


        3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為4000pg/ml),然后在其余七管中各加入500?L標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1),按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋:4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml進(jìn)行稀釋。4000pg/ml標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)濃度,標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點(diǎn)(0pg/ml)。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液(4000pg/ml)未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。




         

        4.生物素化抗體工作液:預(yù)先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。




         

        5.酶結(jié)合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應(yīng)用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用。





         

        6.洗滌方法:
        ?自動洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為300ul/孔,注與吸出間隔為30秒,洗板5次。
        ?手工洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液300ul/孔,靜止30秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板5次。


         

         

        IL-12P40酶聯(lián)免疫試劑盒檢測步驟:

         

        結(jié)果判斷:


        1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長檢測,請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。


        2.計算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均OD值:每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值


        3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中IL-3含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。


        4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。

         

        參數(shù)表征:

         

        1.數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

        本圖僅供參考,應(yīng)以當(dāng)次試驗標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算人IL-12的樣本含量
         

         

        2. 靈敏度:
        低可檢測人IL-12濃度達(dá)30pg/ml,20個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度OD的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,計算相應(yīng)的可檢測濃度。

        3. 特異性:
        不與人G-CSF、GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3 Rα、IL-3 Rβ、IL-4 IL-6、IL-7、IL-8、TGF-β1  、TNF-α、 TNF-β反應(yīng),小鼠GM-CSF、IL-1β、 IL-3、IL-4 、IL-5、IL-6、IL-7等反應(yīng)。

        4. 重復(fù)性:
        板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%。

        5. 回收率:
        在選取的健康人血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的人 IL-12,計算回收率。




         

        6. 線性稀釋:
        分別在選取的4 份健康人血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度人 IL-12,在標(biāo)準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行稀釋,評估線性。

         

         

        人白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒常見問題及解決方法:

         

         

         

        參考文獻(xiàn):
        《Targeted gene therapy of the HSV-TK/hIL-12 fusion gene controlled by the hSLPI gene promoter of human non-small cell lung cancer in vitro》 作者:Shuhong Hao Xiaoyuan Du Yang Song Ming Ren Qiwei Yang Ao Wang Qingyu Wang Haiyue Zhao Zhenwu Du Guizhen Zhang 期刊:oncology letters 影響因子:1.871 PMID:29731853

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