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        • 小鼠白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        小鼠白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2022-08-16
        Solarbio ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。小鼠白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒是將抗小鼠IL-12p40單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上;分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本;洗板后加入生物素化抗小鼠IL-12p40抗體;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD),通過計算出樣本中小鼠IL-12p40的濃度。?

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶貨號SEKM-0012
        規(guī)格96T供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途小鼠IL-12p40含量測定應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
         

        小鼠白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒

        注意事項(xiàng):
        1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
        2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
        3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
        4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
        5. 為避免交叉污染,請在試驗(yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。

        6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
        7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
        8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

         

        安全提示:
        試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護(hù);在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

         

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        自備實(shí)驗(yàn)器材(不提供,可代購)

        1. 酶標(biāo)儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)
        2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
        3. 洗板機(jī)或洗瓶
        4. 37℃孵育箱
        5. 雙蒸水,去離子水,量筒等
        6. 稀釋用聚丙烯試管

         

        小鼠白細(xì)胞介素12p40ELISA試劑盒

        樣本收集及儲存:
        1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
        將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
        2. 血清樣本:
        室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復(fù)凍融。
        3. 血漿樣本:
        將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min ,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。


        ※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值,請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。

         

         

        試劑準(zhǔn)備:
        1. 試劑回溫:首先在實(shí)驗(yàn)前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。


        2. 配制洗滌液:預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。


        3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待 其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),然后按照以下濃度:2000、1000、 500、 250、 125、62.5、31.25、 0 pg/ml進(jìn)行稀釋。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液(2000pg/ml)未用完的應(yīng) 廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。

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        4. 生物素化抗體工作液:預(yù)先計算好試驗(yàn)所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍
        應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。

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        5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗(yàn)所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用。

         

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        6. 洗滌方法: 

        自動洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。 

        手工洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30 秒后甩 凈酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。

         

        小鼠白細(xì)胞介素12p40

        結(jié)果判斷:

        1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長檢測,請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。

        2.計算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均 OD 值:每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值

        3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中IL-12含量可通過對應(yīng)OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

        4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。

         

        參數(shù)表征:

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        1. 數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

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        本圖僅供參考,應(yīng)以當(dāng)次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算小鼠 IL-12 的樣本含量


         

        2. 靈敏度:
        低可檢測小鼠 IL-12 濃度達(dá) 15pg/ml,
        20 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,計算相應(yīng)的可檢測濃度。


        3. 特異性:
        不與小鼠 G-CSF、IL-1a、2、3、4、5、6、7、9、10、12 等反應(yīng),人 IL-12p40、IL-12 P70、 等反應(yīng)。


        4. 重復(fù)性:
        板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%。


        5. 回收率:
        在選取的健康小鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 IL-12,計算回收率。

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        6.
        小鼠白細(xì)胞介素12p40線性稀釋:

        分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 IL-12,在標(biāo)準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行稀 釋,評估線性。

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