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        • 大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2022-08-16
        Solarbio ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒是將抗大鼠TNF-α單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本;洗板后加入生物素化抗大鼠TNF-α抗體;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD),通過計算出樣本中大鼠TNF-α的濃度。?

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶貨號SEKR-0009
        規(guī)格96T供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途大鼠TNF-α含量測定應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
         

        大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

        注意事項:
        1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
        2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱,已復溶但未用完的標準品,請丟棄。
        3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
        4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,且加入試劑的順序應保持*。
        5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。

        6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
        7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
        8. 為保證結(jié)果準確,每次檢測均需做標準曲線。

         

        安全提示:
        試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護;在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實驗室安全防護有關管理規(guī)定執(zhí)行。

         

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        自備實驗器材(不提供,可代購)
        1. 酶標儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)
        2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
        3. 洗板機或洗瓶
        4. 37℃孵育箱
        5. 雙蒸水,去離子水,量筒等
        6. 稀釋用聚丙烯試管

         


        大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

        樣本收集及儲存:
        1. 細胞培養(yǎng)上清:
        將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復凍融。
        2. 血清樣本:
        室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復凍融。
        3. 血漿樣本:
        將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min ,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復凍融。
         

        ※注意:

        血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的值,請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù)。

         

         

        試劑準備:
        1. 試劑回溫:首先在實驗前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。


        2. 配制洗滌液:預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。


        3. 標準品梯度稀釋:加入標準品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,靜置15分鐘待 其*溶解后輕輕混勻(濃度為4000pg/ml),然后按照以下濃度:2000、1000、500、250、 125、62.5、31.25、 0 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液(4000pg/ml)未用完的應 廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。

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        4. 生物素化抗體工作液:預先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍
        應用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應孔中。

         

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        5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用。

         

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        6. 洗滌方法: 

        自動洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。 

        手工洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30 秒后甩 凈酶標板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。

         

        大鼠腫瘤壞死因子α

        結(jié)果判斷:

        1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測,請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。

        2.計算標準品、樣品的平均 OD 值:每個標準品和標本的 OD 值應減去零孔的 OD 值

        3.以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線,樣品中TNF-a含量可通過對應OD 值由標準曲線換算出相應的濃度。

        4.若標本 OD 值高于標準曲線上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。

         

        參數(shù)表征:

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        1. 數(shù)據(jù)及標準曲線

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        本圖僅供參考,應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算大鼠 TNF-a的樣本含量


         

        2. 靈敏度:
        低可檢測大鼠 TNF-a 濃度達 15pg/ml,
        20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差,計算相應的可檢測濃度。


        3. 特異性:
        不與大鼠 GDNF、 IFN-γ、 IL-1β、 IL-2、 IL-4、 β-NGF 等反應,人 TNF-a、TNF-β 等反應。


        4. 重復性:
        板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%。


        5. 回收率:
        在選取的健康大鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的大鼠 TNF-a,計算回收率。

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        6. 線性稀釋:

        分別在選取的 4 份健康大鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度大鼠 TNF-a,在標準曲線動力學范圍內(nèi)進行稀 釋,評估線性。

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         TNF-αELISA KIT(Rat)

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