二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1285
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前取102 μL加入898μL蒸餾水得到1mol/L（即1000μmol/mL）的過氧化*溶液，2-8℃保存4周。
2. 0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：取20μL 1000μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液和980μL蒸餾水混合配成20μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液；再取25μL 20μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液和975μL蒸餾水混合配成0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品說明：
DAO（EC1.4.3.6）廣泛存在于動物（腸黏膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白質(zhì)合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損程度。
DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫，H₂O₂氧化亞鐵*中的Fe²⁺生成Fe³⁺，F(xiàn)e³⁺進(jìn)一步與4-氨基安*比林和酚反應(yīng)生成紅色醌類化合物，在505nm處有特征吸收峰，通過測定505nm處的吸光值來計算DAO的活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

1. 稱取0.1009g竹葉樣本，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，10000g 4℃離心20min，取上清置冰上待測，之后按照測定步驟，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=1.0176-0.4116=0.6060，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管

-A空白管=0.3557-0.0767=0.279；按樣本質(zhì)量計算酶活得：
DAO活性 (U/g 質(zhì)量) = 0.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =10.763 U/g 質(zhì)量

1. 稱取0.1000g十二指腸樣本，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，10000g 4℃離心20min，取上清置冰上待測，之后按照測定步驟，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.2336-0.1803=0.0533，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.3557-0.0767=0.279；按樣本質(zhì)量計算酶活得：

DAO活性 (U/g 質(zhì)量)= 0.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.955 U/g 質(zhì)量
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