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        • γ-谷氨酰半*氨酸連接酶測試盒 微量法
        • γ-谷氨酰半*氨酸連接酶測試盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        γ-谷氨酰半*氨酸連接酶測試盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2025-04-22
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        γ-谷氨酰半*氨酸連接酶測試盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        γ-glutamylcysteine Ligase(GCL) Activity Assay Kit
        別名
        γ-谷氨酰半*氨酸連接酶試劑盒 GCL Kit γ-谷氨酰半*氨酸連接酶(GCL)試劑盒 γ-谷氨酰半*氨酸連接酶(GCL)測試盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotome

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1215
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:GCL 是 GSH 合成的限速酶,GSH 對 GCL 有反饋抑制作用。應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        γ-谷氨酰半*氨酸連接酶(GCL)活性檢測試劑盒說明書
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
        貨號BC1215
        規(guī)格100T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        試劑一液體65 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二A液體5 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二B粉劑×1-20℃保存
        試劑三粉劑×12-8℃保存
        試劑四液體7 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑五粉劑×12-8℃保存
        試劑六粉劑×12-8℃保存
        試劑七液體5mL×1瓶2-8℃保存
        標(biāo)準品液體1 mL×1支 2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二B:臨用前加2 mL蒸餾水充分震蕩溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,禁止反復(fù)凍融;

        2. 試劑二的配制:臨用前根據(jù)樣本量按試劑二A:試劑二B=260μL104μL(共364μL,7T)的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,當(dāng)天用完。

        3. 試劑三:臨用前加5 mL蒸餾水充分震蕩溶解,2-8℃可以保存4周;

        4. 試劑五:臨用前加入5 mL蒸餾水溶解,用不完的試劑2-8℃保存2周;

        5. 試劑六:臨用前加入5 mL蒸餾水溶解,用不完的試劑2-8℃保存2周;

        6. 工作液的配制:臨用前根據(jù)樣本量按試劑五:試劑六:試劑七=0.1mL:0.1mL0.1mL(共0.3mL,3T)的比例配制,配好的工作液應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,限當(dāng)天使用。(注意:配制工作液最好使用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。

        7. 標(biāo)準品:10 μmol/mL磷標(biāo)準溶液。

        8. 0.1μmol/mL磷標(biāo)準溶液的配制:臨用前取0.1mL 10 μmol/mL標(biāo)準液和0.9mL蒸餾水混合,配制濃度為1 μmol/mL;再取0.1mL 1 μmol/mL標(biāo)準液和0.9mL蒸餾水混合配制成0.1μmol/mL磷標(biāo)準溶液使用。

        產(chǎn)品說明:
        GCL(glutamate cysteine ligase)是GSH合成的限速酶,GSHGCL有反饋抑制作用。GCL基因表達受多種因素調(diào)節(jié),如氧化劑、抗氧化劑、生長因子和炎癥因子等。GCL活性高低對GSH含量和GSH/*比值有重要影響。
        在ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷*酸和半*氨酸合成γ-谷氨酰半*氨酸;同時ATP去磷酸化產(chǎn)生無機磷分子,通過測定無機磷增加速率,即可計算出GCL活性。


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、冷凍離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞破碎儀和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
        注意事項:

        1. 樣本處理等過程均需要在冰上進行,且須在當(dāng)日測定酶活力,以免影響其活力。如果是勻漿液,避免反復(fù)凍

        融。

        1. 樣本測定前先取1-2個樣做預(yù)實驗,如吸光值大于1,應(yīng)先用試劑一(或者生理鹽水)稀釋到適當(dāng)倍數(shù),哺乳動物組織和血液一般稀釋3-5倍。

        2. 細胞中GCL活性測定時,細胞數(shù)目須在300-500萬之間,細胞中GCL的提取時可加試劑一(或生理鹽水)后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。

        3. 測定吸光值時請于水浴后10-40分鐘內(nèi)測完。

        實驗實例:

        1. 取0.1g三葉草加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.784-0.415=0.369,ΔA標(biāo)=A標(biāo)準管-A空白管=0.371-0.042=0.329,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        GCL(U/g 質(zhì)量)=0.0544×ΔA÷ΔA標(biāo)÷W=0.61 U/g 質(zhì)量。

        1. 取0.1g柳樹加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.530-0.366=0.164,ΔA標(biāo)=A標(biāo)準管-A空白管=0.371-0.042=0.329按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        GCL(U/g 質(zhì)量)=0.0544×ΔA÷ΔA標(biāo)÷W=0.271 U/g 質(zhì)量。
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC1170/BC1175 還原型谷*甘肽(GSH)含量檢測試劑盒
        BC1180/BC1185 氧化型谷*甘肽(*)含量檢測試劑盒

        γ-谷氨酰半*氨酸連接酶測試盒 微量法 γ-谷氨酰半*氨酸連接酶測試盒 微量法

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