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        • 乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        • 乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-22
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱(chēng)
        Acetaldehyde Dehydrogenase(ALDH) Activity Assay Kit
        別名
        乙醛脫氫酶試劑盒 ALDH Kit 乙醛脫氫酶(ALDH)試劑盒 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法 Sp

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢(xún)
        分子式詳詢(xún)純度詳詢(xún)
        分子量詳詢(xún)貨號(hào)BC0755
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義:乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
        貨號(hào):BC0755
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件
        提取液液體110 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體10 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×2-20℃保存
        試劑三液體0.5 mL×1支2-8℃保存
        試劑四液體1 mL×1支2-8℃保存
        試劑五液體8 mL×1瓶2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前取一支試劑二加入1.5mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2. 試劑四:為有毒試劑,實(shí)驗(yàn)室注意防護(hù);

        3. 工作液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑二:試劑三:試劑四=60µL20µL4µL6µL1T的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明:
        乙醛脫氫酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)是醛脫氫酶的一種,能夠催化乙醛、正 丁醛、肉桂醛、苯甲醛等有毒醛類(lèi)快速脫氫,催化醛類(lèi)物質(zhì)氧化生成羧酸,清除有害醛類(lèi)并減少脂類(lèi)的過(guò)氧化反應(yīng),被認(rèn)為是生物體內(nèi)活性氧物質(zhì)的解毒劑。乙醛脫氫酶不僅能夠轉(zhuǎn)化代謝對(duì)生物體有害的醛類(lèi),還在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測(cè)方面有較廣泛的研究應(yīng)用。

        乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,利用NADH340nm處吸光值的變化即可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例加入提取液(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,于4℃10000g離心20min,取上清置于冰上待測(cè)。

        2. 細(xì)胞/細(xì)菌樣本:按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例加入提取液(建議500萬(wàn)細(xì)胞/細(xì)菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);于4℃,10000g離心20min,取上清置于冰上待測(cè)。

        3. 血清(漿)等液體:直接檢測(cè)。若液體有渾濁則離心后進(jìn)行測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 工作液37預(yù)熱10min。

        3. 操作表:

        試劑名稱(chēng)(µL)空白管測(cè)定管
        樣本-40
        蒸餾水40-
        工作液9090
        試劑五7070
        在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測(cè)定1min時(shí)的吸光值A1,迅速置于37(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)水浴或培養(yǎng)箱30min(酶標(biāo)儀有控溫功能可將溫度調(diào)至37或25℃),拿出迅速擦干測(cè)定31min時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定,ΔA空白=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白。空白管只需做1-2次。

        三、ALDH酶活計(jì)算
        A 按微量石英比色皿計(jì)算:

        1. 按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘生成1nmol的NADH定義為1個(gè)酶活單位。
        ALDH酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr)÷T=26.795×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每克樣本每分鐘生成1nmol的NADH定義為1個(gè)酶活單位。
        ALDH酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T=26.795×ΔA÷W

        1. 按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每106個(gè)細(xì)胞/細(xì)菌每分鐘生成1nmolNADH定義為1個(gè)酶活單位。
        ALDH酶活(U/106 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷V樣總×N÷T=26.795×ΔA÷N

        1. 按液體體積計(jì)算

        酶活定義:每mL樣本每分鐘生成1nmolNADH定義為1個(gè)酶活單位。
        ALDH酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=26.795×ΔA
        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本上清體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,需自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;N:細(xì)胞/細(xì)菌總數(shù),以106計(jì);T:反應(yīng)時(shí)間,30min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。
        B 按96UV板計(jì)算:



        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96UV板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。
        注意事項(xiàng):

        1. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,其OD值不超過(guò)0.3(比色皿)0.296孔板),變化不超過(guò)0.01。

        2. 樣品ΔA大于1時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí),可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(60min更長(zhǎng)時(shí)間)來(lái)測(cè)定。計(jì)算時(shí)注意同步更改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1084g兔肝臟,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿研磨,離心取上清,之后按照測(cè)定步驟操作,用96UV板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)=0.878-0.838=0.040,ΔA空白=A2空白-A1空白=0,ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.040-0=0.040,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        ALDH酶活(U/g質(zhì)量)=0.040÷6.22×103×0.6×109×2×10-4÷0.04×0.1023÷1÷30=16.479 U/g質(zhì)量。

        1. 取0.1100g小鼠肝臟,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿研磨,離心取上清,之后按照測(cè)定步驟操作,用96UV板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)=1.624-0.798=0.826,ΔA空白=A2空白-A1空白=0,ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.826-0=0.826,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        ALDH酶活(U/g質(zhì)量)=0.826÷6.22×103×0.6×109×2×10-4÷0.04×0.1023÷1÷30=335.343 U/g質(zhì)量。
        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):
        [1] Tongmeng Jiang,Jinmin Zhao,Shan Yu,et al. Untangling the response of bone tumor cells and bone forming cells to matrix stiffness and adhesion ligand density by means of hydrogels. Biomaterials. January 2019;188:130-143.(IF5.452)
        [2] Chong Li, Shi Gao, Xiaotong Li,et al. Efficient metabolic evolution of engineered Yarrowia lipolytica for succinic acid production using a glucose-based medium in an in situ fibrous bioreactor under low-pH condition. Biotechnology for Biofuels. August 2018;(IF5.452)
        [3] Yufei He,Xiaoyan Ci,Ying Xi,et al. Untangling the response of bone tumor cells and bone forming cells to matrix stiffness and adhesion ligand density by means of hydrogels. Biomaterials. September 2018;(2019)188:130-143.(IF8.806)
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0590/BC0595 游離脂肪酸(FFA)含量檢測(cè)試劑盒
        BC2340/BC2345 脂肪酶(LPS)活性檢測(cè)試劑盒
        BC1080/BC1085 乙醇脫氫酶(ADH)活性檢測(cè)試劑

        乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法 乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒 微量法


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