L-乳酸脫氫酶（L-LDH）活性檢測試劑盒說明書

微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0685
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入1.3 mL蒸餾水充分溶解備用，配好后可分裝成小管-20℃保存，可保存2周，禁止反復凍融；

2. 標準品：20 μmol/mL 丙 酮酸鈉溶液。

產(chǎn)品說明：
L-LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙 酮酸與L-乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD⁺/NADH之間互變。

L-LDH催化NAD⁺氧化L-乳酸生成丙 酮酸，丙 酮酸進一步與2,4-二*苯 肼作用生成丙 酮 酸二硝 基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與 丙 酮酸濃度成正比

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 
   

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2. ΔA大于1.3或者小于0.01事，建議將樣本用蒸餾水稀釋或者增大樣本量進行實驗、

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實驗實例：

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2. 稱取0.103g景天葉片，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.275-0.199=0.076，帶入標曲y=0.5218x+0.0063，R²=0.9983，得x=0.134 µmol/mL，計算乳酸脫氫酶活性得：L-LDH（U/g 質(zhì)量）=66.67 ×x÷W =86.74 U/g

3. 稱取0.109 g兔肝，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清用蒸餾水稀釋80倍后置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.795-0.132=0.663，帶入標曲y=0.5218x+0.0063，R²=0.9983，得x=1.259 µmol/mL，計算乳酸脫氫酶活性得：L-LDH（U/g 質(zhì)量）=66.67 ×x÷W ×稀釋倍數(shù)=61605.53 U/g

4. 取50μL馬血清之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.415-0.161=0.254，帶入標曲y=0.5218x+0.0063，R²=0.9983，得x=0.475 µmol/mL，計算乳酸脫氫酶活性得：L-LDH（U/mL）=66.67 ×x =31.67 U/mL

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相關發(fā)表文獻：

1. Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.

2. Zhang H, Da Z, Feng Y, et al. Enhancing the electricity generation and sludge reduction of sludge microbial fuel cell with graphene oxide and reduced graphene oxide[J]. Journal of cleaner production, 2018, 186: 104-112.

3. Zhao B, Sun L, Jiang X, et al. Genipin protects against cerebral ischemia-reperfusion injury by regulating the UCP2-SIRT3 signaling pathway[J]. European journal of pharmacology, 2019, 845: 56-64.

4. Zhao H L, Wu B Q, Luo Y, et al. Exogenous hydrogen sulfide ameliorates high glucose-induced myocardial injury & inflammation via the CIRP-MAPK signaling pathway in H9c2 cardiac cells[J]. Life sciences, 2018, 208: 315-324.

參考文獻：

1. Huang P H, Fu L C, Huang C S, et al. The uptake of oligogalacturonide and its effect on growth inhibition, lactate dehydrogenase activity and galactin-3 release of human cancer cells[J]. Food chemistry, 2012, 132(4): 1987-1995.

2. Papaneophytou C, Zervou ME, Theofanous A. Optimization of a Colorimetric Assay to Determine Lactate Dehydrogenase B Activity Using Design of Experiments[J]. Journal of Biomolecular Screening, 2021, 26(3): 383-399.

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