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        • 磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-22
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Phosphofructokinase(PFK) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC0535
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途PFK(EC 2.7.1.11)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,負(fù)責(zé)將應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒說明書
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號(hào):BC0535
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體110 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體20 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二A粉劑×1-20℃保存
        試劑二B粉劑×1-20℃保存
        試劑二C粉劑×2-20℃保存
        試劑二D粉劑×1-20℃保存
        試劑三液體25μL×12-8℃保存
        試劑四液體10μL×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二A:臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2. 試劑二B:臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3. 試劑二C:臨用前取一支加入0.5mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        4. 試劑二D:臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        5. 試劑三:臨用前根據(jù)用量按照試劑三:蒸餾水為1μL:50μL(約5T)的體積比例充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        6. 試劑四:臨用前根據(jù)用量按照試劑四:蒸餾水為1μL:125μL(約12T)的體積比例充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        7. 工作液的配制:根據(jù)樣本量按試劑一:試劑二A:試劑二B:試劑二C:試劑二D =8mL0.5mL0.5mL0.5mL0.5mL(約55T)的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:
        磷酸果糖激酶(Phosphofructokinase,PFK,EC 2.7.1.11)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,負(fù)責(zé)將果糖-6-磷酸和ATP轉(zhuǎn)化為果糖二磷酸和ADP,是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。
        PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-二磷酸和ADP,丙 酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測(cè)定NADH下降速率,即可反映PFK活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
        注意事項(xiàng):

        1. 測(cè)定過程中試劑三、試劑四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

        2. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

        3. 最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        4. 不同勻漿組織中PFK活性不一樣,若ΔA>0.5,則說明活性太高,必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液,或縮短反應(yīng)時(shí)間至2min5min,使ΔA<0.5,以提高檢測(cè)的靈敏度。注意同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g黑麥草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清之后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A1-A2=1.6086-1.2986=0.31,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        PFK活性(U/g 質(zhì)量)=535×ΔA÷W=535×0.31÷0.1=1658.5 U/g 質(zhì)量。

        1. 取0.1g桃葉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清之后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A1-A2=1.7025-1.6159=0.0866,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        PFK活性(U/g 質(zhì)量)=535×ΔA÷W=535×0.057÷0.1=463.31 U/g 質(zhì)量。
        參考文獻(xiàn):

        1. Papagianni M, Avramidis N. Lactococcus lactis as a cell factory: a twofold increase in phosphofructokinase activity results in a proportional increase in specific rates of glucose uptake and lactate formation[J]. Enzyme and microbial technology, 2011, 49(2): 197-202.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2200/BC2205  丙 酮酸(PA)含量檢測(cè)試劑盒
        BC2230/BC2235  乳酸(LA)含量檢測(cè)試劑盒
        BC2190/BC2195  磷酸烯醇式丙 酮酸羧化酶(PEPC)活性檢測(cè)試劑盒
        BC2250/BC2255  3-磷酸甘油酸激酶(PGK)活性檢測(cè)試劑盒

        磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法 磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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