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        • 檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒 微量法
        • 檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-11
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Citric Acid(CA) Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2155
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:CA是生物體內(nèi)常見的有機(jī)酸,是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外,CA是三羧酸循應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒說明書
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號:BC2155
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        試劑一液體120 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二液體22 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑三液體0.25 mL×1支-20℃保存
        試劑四粉劑×2常溫保存
        試劑五液體3 mL×1瓶2-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品液體1 mL×1支2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑三:為易揮發(fā)試劑,用完后盡快密封,-20℃保存;

        2. 試劑四:臨用前取1支加入1.5 mL試劑一,充分溶解,用不完的試劑2-8℃保存2周。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)品:2 μmol/mL檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:
        CA是生物體內(nèi)常見的有機(jī)酸,是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外,CA是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)物。
        酸性條件下,檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+,在545nm處有特征吸收峰;通過測定545nm吸光值的增加,即可計(jì)算出樣本中檸檬酸含量。
        技術(shù)指標(biāo):
        低檢出限:0.04 μmol/mL
        線性范圍:0.05-5 μmol/mL
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 液體樣本中檸檬酸提?。喝?.1mL液體加試劑一0.9mL,充分混勻,11000g,4℃離心10min,取上清液置于冰上待測。(若測定值較低,可適當(dāng)調(diào)整液體樣本和試劑一的體積比例,如(0.2mL液體樣本+0.8mL試劑一)或(0.5mL液體樣本+0.5mL試劑一)。)

         

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。  

        2. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3. 線粒體中檸檬酸提?。悍Q約0.1g組織,加入1mL試劑一,冰上充分研磨,600g,4℃離心5min;取上清至另一EP管中,11000g,4℃離心10min,棄上清(此上清液可用于細(xì)胞質(zhì)CA含量測定);向沉淀中加試劑二200μL,以及試劑三2μL,充分懸浮溶解,11000g,4℃離心10min,取上清液置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到545nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑一置于30℃水浴中預(yù)熱30min以上。

        3. 操作表(按下表在1.5mLEP管/96孔板管中加入相應(yīng)試劑):

        試劑名稱(µL)空白管測定管標(biāo)準(zhǔn)管
        蒸餾水20--
        上清液-20-
        標(biāo)準(zhǔn)品--20
        試劑一140140140
        試劑四202020
        試劑五202020
        充分混勻后室溫靜置30min,于545nm測定吸光度,記為A空白管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管,計(jì)算ΔA測定=A測定管-A空白管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需測定1-2次。

        三、檸檬酸含量計(jì)算

        1. 按液體體積計(jì)算:

        檸檬酸含量(μmol/mL= C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F= 20×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

        1. 按組織質(zhì)量計(jì)算:

        檸檬酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷W = 2×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) ÷W

        1. 按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算:

        檸檬酸含量(μmol/104 cell)= C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷N=2×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

        1. 按蛋白濃度計(jì)算:

        檸檬酸含量(μmol/mg prot= C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) ×V÷Cpr×V樣)= 2×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
        C標(biāo)準(zhǔn)液:標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,2μmol/mLF:樣本稀釋倍數(shù),(0.1mL樣本+0.9mL試劑一)÷0.1mL樣本=10V總:上清液總體積,1.0mL;W:樣本質(zhì)量,g;N細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量,以萬計(jì);Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,需自行測定;V樣:加入的樣本體積,20μL=0.02 mL
        注意事項(xiàng):
        1、樣本處理等過程均需要在冰上進(jìn)行。
        2、試劑五為易致癌物質(zhì),實(shí)驗(yàn)過程中,需佩戴手套,避免試劑五濺到皮膚上。
        3、檸檬酸試劑一不能用于蛋白含量測定,如需測定蛋白含量,需另取組織進(jìn)行測定。
        4、若反應(yīng)30min后有明顯的黑色小顆粒,屬于正?,F(xiàn)象,需將樣本稀釋后再測。
        5、如果樣本吸光值大于0.596孔板)或1.0(比色皿),建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測定。
        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1065g竹子葉片加入1mL試劑一,冰上充分研磨,11000g 4℃離心10min,取上清液按照測定步驟操作,使用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.185-0.109=0.076,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管= 0.292- 0.109=0.183,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:

        檸檬酸含量(μmol/g 質(zhì)量)=2×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =7.80 μmol/g 質(zhì)量。

        1. 取0.1094g兔腎臟組織加入1mL試劑一,冰上充分研磨,11000g 4℃離心10min,取上清液按照測定步驟操作,使用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.270-0.109=0.161,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管= 0.292- 0.109= 0.183,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:

        檸檬酸含量(μmol/g 質(zhì)量)=2×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) ÷W= 16.08 μmol/g 質(zhì)量。

        1. 取0.1mL小鼠血清加試劑一0.9mL,充分混勻,11000g 4℃離心10min,取上清液按照測定步驟操作,使用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=A測定管-A空白管= 0.174-0.109=0.065,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.292-0.109 =0.183,按液體樣本的體積計(jì)算:

        檸檬酸含量(μmol/mL)=20×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=7.10 μmol /mL。
        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease.March 2019;(IF5.959)

        2. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018;

        3. Zhou Z, Duan Y, Zhou M. Carbendazim‐resistance associated β2‐tubulin substitutions increase deoxynivalenol biosynthesis by reducing the interaction between β2‐tubulin and IDH3 in Fusarium graminearum[J]. Environmental microbiology, 2019.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒
        BC0950/BC0955  琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒
        BC0380/BC0385  丙 酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

        檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒 微量法 檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒 微量法

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