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        • 糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-11
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Chymotrypsin Activity Assay Kit
        別名
        糜*白酶試劑盒 糜*白酶測試盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2335
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:糜*白酶,又稱胰凝*蛋白酶,是胰腺分泌的一種蛋白水解酶,能迅速分解變性應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        糜*白酶活性檢測
        試劑盒說明書

        微量法
        貨號:BC2335
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體10 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×1-20℃保存
        試劑三液體5 mL×1瓶2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前溶于1.6 mL甲醇中,再用水定容至10 mL。可分裝后-20℃保存,避免反復凍融。

        產(chǎn)品說明:
        糜*白酶,又稱胰凝*蛋白酶,是胰腺分泌的一種蛋白水解酶,能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜*白酶的功能與胰蛋*酶相似,但是具有分解能力強、毒性低和不良反應小等優(yōu)點。臨床上糜*白酶用于痰液稀化,對膿性和非膿性痰液均有效;也用于創(chuàng)傷或手術后傷口愈合,如白內(nèi)障摘除。
        糜*白酶催化BTEE水解,產(chǎn)物在256nm有特征光吸收;通過測定256nm光吸收增加速率,來計算糜*白酶活性。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品
        紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/ 96UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL15-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清即粗酶液。

        2. 血清(漿):直接檢測。

        • 測定步驟

        1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至256nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑一置于25℃水浴中保溫30min

        3. 樣本測定:




         

        試劑名稱(μL測定管
        試劑一90
        試劑二90
        試劑三20
        樣本20

        將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96孔UV板后充分混勻,于256nm處測定初始吸光值A13min時的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。

        • 糜*白酶活性計算公式

        1. 按微量石英比色皿計算:

        1、按樣本蛋白濃度計算
        活性單位定義:25℃每毫克蛋白每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
        糜*白酶活(U/mg prot)=(ΔA×V反總÷ε÷d) ÷(Cpr×V)÷T=3.8×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計算

        活性單位定義:25℃每克樣本每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
        糜*白酶活(U/g 質(zhì)量)= (ΔA×V反總÷ε÷d) ÷(W×V÷V 提取)÷T=3.8×ΔA÷W

        1. 按血清(漿)體積計算

        活性單位定義:25℃每毫升血清(漿)每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
        糜*白酶活(U/mL )=(ΔA×V反總÷ε÷d)÷V÷T=3.8×ΔA
        V樣:加入反應體系中粗酶液體積,0.02mL;Cpr:粗酶液蛋白濃度,mg/mL,需要另外測定;W:樣本質(zhì)量,gV反總:反應總體積,0.22mL;V提取:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,3min;εBTEE消光系數(shù),0.964mL/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cm。

        1. 96UV計算:

        將上述計算公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進行計算即可。
        注意事項:

        1. ΔA大于0.15或者吸光值大于1時,建議將樣本用提取液稀釋后測定,注意計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2. ΔA小于0.04時,建議將樣本濃縮或者增加樣本體積進行測定,注意計算公式除以濃縮倍數(shù)或者改變體積。

        實驗實例:

        1. 取0.1g腎臟加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清后再用提取液稀釋10倍,之后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA=A2-A1=0.9955-0.9192=0.0763,按樣本質(zhì)量計算酶活得:糜*白酶活(U/g 質(zhì)量)=3.8×ΔA÷W×10(稀釋倍數(shù))=28.994 U/g 質(zhì)量。

        相關系列產(chǎn)品:
        BC2280/BC2285 酸性*白酶(ACP)活性檢測試劑盒
        BC2290/BC2295 中性*白酶(NP)活性檢測試劑盒
        BC2320/BC2325 胃蛋白*活性檢測試劑盒

        糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法 糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法

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