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        • 山*醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        山*醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-11
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        山*醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Sorbitol Dehydrogenase(SDH) Activity Assay Kit
        別名
        山*醇脫氫酶試劑盒 山*醇脫氫酶測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2535
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義:SDH(EC 1.1.1.14)催化山梨醇脫氫生成果糖,是調(diào)控生物體內(nèi)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        山*醇脫氫酶(SDH)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
        貨號(hào):BC2535
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體110 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×52-8℃保存
        試劑二液體4mL×12-8℃保存
        試劑三液體4mL×12-8℃保存
        試劑四粉劑×5-20℃保存
        試劑五液體25 mL×1瓶2-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1-20℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:取3.4 mL試劑五加入1瓶試劑一粉劑中溶解,再加入一支試劑四,現(xiàn)用現(xiàn)配,24 h變質(zhì);

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1.4 mL蒸餾水,即10 μmol/mL NADH標(biāo)準(zhǔn)品。-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說(shuō)明:
        SDH(EC 1.1.1.14)催化山*醇脫氫生成果糖,是調(diào)控生物體內(nèi)山*醇含量的關(guān)健酶之一。SDH催化山*醇脫氫生成果糖,同時(shí)還原NAD+生成NADH,生成的NADH能將電子傳遞給NBT生成紫色的甲臜,根據(jù)這一原理可以計(jì)算SDH活性。
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱超聲破碎儀,可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
        1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000×g 4℃離心10 min,取上清,置冰上待測(cè)。
        2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1 g組織,加入1 mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000 ×g 4℃離心10 min,取上清,置冰上待測(cè)。

        3、血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。
        二、測(cè)定步驟
        1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570 nm,可見(jiàn)分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
        2、標(biāo)準(zhǔn)管的測(cè)定:將10 μmol/mL NADH標(biāo)準(zhǔn)品用水稀釋至1.5、1、0.9、0.80.7、0.60.5、0.4、0.3 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液
        (1) 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

        序號(hào)稀釋前濃度(µmol/mL)標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL)蒸餾水體積(µL)稀釋后濃度(µmol/mL)
        110301701.5
        2101009001
        31180200.9
        41160400.8
        51140600.7
        61120800.6
        711001000.5
        81801200.4
        91601400.3

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需20µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
        (2)標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定表

        試劑名稱(μL)標(biāo)準(zhǔn)管空白管
        標(biāo)準(zhǔn)溶液20-
        蒸餾水-20
        試劑二3030
        試劑三3030
        試劑一120120
        混勻后室溫避光放置20 min,取200 μL于微量玻璃比色皿/96孔板中分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管和空白管在570 nm下的吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管,計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。

        3、樣本的測(cè)定:

        試劑名稱(μL)測(cè)定管
        樣本20
        試劑二30
        試劑三30
        試劑一120

        將上述試劑按順序加微量玻璃比色皿/96孔板中,加試劑一的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),記錄 10 秒時(shí)的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)3分鐘;迅速取出比色皿并擦干,570 nm下比色,記錄310秒時(shí)的吸光度A2,計(jì)算ΔA測(cè)定=A2-A1。(整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要避光)

        注意事項(xiàng):
        1.ΔA大于0.7時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后測(cè)量,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
        2.測(cè)定過(guò)程中樣本和工作液在冰上放置,以免變性和失活。
        3.比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
        參考文獻(xiàn):
        Aguayo M F, Ampuero D, Mandujano P, et al. Sorbitol dehydrogenase is a cytosolic protein required for sorbitol metabolism in Arabidopsis thaliana[J]. Plant science, 2013, 205: 63-75.
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2450/BC2455 植物組織果糖(FT)含量檢測(cè)試劑盒
        BC2540/BC2545 纖維素酶(CL)活性檢測(cè)試劑盒
        BC2510/BC2515 海藻糖酶(THL)活性檢測(cè)試劑盒
        BC2520/BC2525 山*醇含量檢測(cè)試劑盒

        山*醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 山*醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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