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        • 葡萄糖脫氫酶(GCDH)檢測試劑盒 微量法
        • 葡萄糖脫氫酶(GCDH)檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        葡萄糖脫氫酶(GCDH)檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-11
        儲存條件
        -20℃
        葡萄糖脫氫酶(GCDH)檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Glucose Dehydrogenase(GCDH) Activity Assay Kit
        別名
        葡萄糖脫氫酶試劑盒 GCDH Kit 葡萄糖脫氫酶(GCDH)試劑盒 葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒
        檢測方法
        微量法 Spect

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2695
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        葡萄糖脫氫酶(GCDH)活性檢測試劑盒說明書
        微量法
        貨號:BC2695
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體25 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×12-8℃保存
        試劑三粉劑×1-20℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前加入7.5 mL試劑一溶解,用不完的試劑2-8℃保存8;

        2. 試劑三:臨用前每瓶加入5 mL試劑一溶解,用不完的試劑建議分裝后-20℃避光保存4;

        3. 工作液的配制:按照試劑一試劑二試劑三為432的體積比例充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配,用前37℃預(yù)熱10 min。

        產(chǎn)品說明:
        GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多種微生物和高等動物的肝臟中。GCDH是一種制備高含量低聚果糖的理想用酶,同時也是臨床血糖測定的診斷用酶,可廣泛用于食品工業(yè)及醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域中。
        GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH340nm處吸光值的變化即可反映葡萄糖脫氫酶的活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式低溫離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
        組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后,8000g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。
        細胞或細菌:先收集細胞或細菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細胞數(shù)量(104個)︰提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬個細胞或細菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞或細菌(功率200 W,超聲3s,間隔7s,總時間5min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
        血清(漿):直接檢測。
        二、測定步驟

        1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 操作表:在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑:

        試劑名稱(µL)空白管測定管
        工作液180180
        蒸餾水20-
        樣本-20
        加入工作液即開始計時,立即混勻,于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37水浴或培養(yǎng)箱1min(酶標(biāo)儀有控溫功能可將溫度調(diào)至37),拿出迅速擦干測定1min 10s時的吸光值A2,計算ΔA測定管=A2測定-A1測定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。
        • GCDH酶活計算

        A、按微量石英比色皿計算:

        1. 按樣本蛋白濃度計算

        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
        GCDH酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=1607.7×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:每克樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
        GCDH酶活(U/g質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T =1607.7×ΔA÷W

        1. 按細胞或細胞數(shù)量計算

        酶活定義:每104個細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
        GCDH酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷V樣總×細胞數(shù)量(萬個))÷T
        =1607.7×ΔA÷細胞數(shù)量(萬個)

        1. 按液體體積計算

        酶活定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolNADH定義為一個酶活力單位。
        GCDH酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=1607.7×ΔA
        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間1min。
        B、按96UV板計算:
        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進行計算即可。
        注意事項:

        1. 樣本提取上清液置于冰上待測,且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測完。

        2. 當(dāng)A1或A2大于1.7時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。

        3. 當(dāng)ΔA大于1.5時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。

        實驗實例:

        1. 取0.1g肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,使用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.5806-0.5291=0.0515,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0294-0.0294=0,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0515-0=0.0515,按樣本質(zhì)量計算酶活得:GCDH酶活(U/g質(zhì)量)=1607.7×ΔA÷W =1607.7×0.0515÷0.1=827.966U/g 質(zhì)量。

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