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        • 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-11
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱(chēng)
        磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱(chēng)
        Phosphoenolpyruvate Carboxykinase(PEPCK) Activity Assay Kit
        別名
        磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)試劑盒 PEPCK Kit 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PE

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢(xún)
        分子式詳詢(xún)純度詳詢(xún)
        分子量詳詢(xún)貨號(hào)BC3315
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義: PEPCK(EC 4.1.1.32)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        貨號(hào)BC3315

        規(guī)格100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體18 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20保存

        試劑三

        液體18 μL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體62 μL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        粉劑×1

        -20保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入15 mL試劑一溶解??扇芙夂蠓盅b-20保存,避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑三:液體置于試劑瓶?jī)?nèi)EP管內(nèi)。臨用前加入蒸餾水按體積比1120稀釋?zhuān)F(xiàn)用現(xiàn)配

        3、 試劑四:液體置于試劑瓶?jī)?nèi)EP管內(nèi)。臨用前加入蒸餾水按體積比7250稀釋?zhuān)F(xiàn)用現(xiàn)配。

        4、 試劑五:粉劑置于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管內(nèi)。臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解;可溶解后分裝-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

        5、 工作液的配制:將試劑二、試劑三、試劑四按7:1:1V:V:V)的比例配制工作液,工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明

        PEPCKEC 4.1.1.32)廣泛存在于動(dòng)物、開(kāi)花植物、藻類(lèi)、部分真菌和細(xì)菌中。該酶催化草酰乙酸轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸是調(diào)節(jié)糖異生途徑的第一限速酶。

        PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測(cè)定NADH下降速率,即可反映PEPCK活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        自備的儀器和用品

        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 

         

         

        細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。

        測(cè)定步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 將工作液置于37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。

        3、 操作表:在微量石英比色皿/96UV板中依次加入下列試劑:

        試劑名稱(chēng)

        空白管

        測(cè)定管

        樣本(µL


        10

        蒸餾水(µL

        10


        工作液(µL

        180

        180

        試劑五(µL

        10

        10

        加入試劑五后立即混勻,于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A11min10s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管空白管只需做1-2。

        三、PEPCK酶活計(jì)算

        A 按微量石英比色皿計(jì)算:

        1、 按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPCK酶活(U/mg prot= ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T= 3215.4×ΔA÷Cpr

        2、 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPCK酶活(U/g 質(zhì)量= ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T=3215.4×ΔA÷W

        3、 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPCK酶活(U/104 cell= ΔA÷ε×d×109×V反總÷500×V÷V樣總)÷T=6.43×ΔA

        4、 按血清(漿)體積計(jì)算

        酶活定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPCKU/mL)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=3215.4×ΔA

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.0002L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g,T:反應(yīng)時(shí)間:1min500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn);109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。

        B 96UV板計(jì)算:

        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。

        注意事項(xiàng)


        1、 當(dāng)A1小于1ΔA大于0.6時(shí)(96UV板是當(dāng)A1小于0.6ΔA大于0.4時(shí)),建議將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)后再進(jìn)行測(cè)定,以提高檢測(cè)靈敏度。

        2、 酶活性高的樣本如動(dòng)物肝、腎等組織,建議將提取液稀釋5倍或5倍以上測(cè)定。

        3、 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,變化不超過(guò)0.06。

        4、 加樣、混勻等步驟要迅速,秒表計(jì)時(shí)要準(zhǔn)確。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后再用提取液稀釋2倍,之后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.1298-0.4464=0.6834ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.3819-1.3463=0.0356,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.6834-0.0356=0.6478,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活

        PEPCK酶活(U/g質(zhì)量= 3215.4×ΔA÷W×2(稀釋倍數(shù))=3215.4×0.6478÷0.1×2=41658.72 U/g 質(zhì)量

        2、 0.1g蘆薈加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.4015-1.2665=0.135,ΔA空白管= A1空白-A2空白=1.3819-1.3463=0.0356ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.135-0.0356=0.0994,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得

        PEPCK酶活(U/g質(zhì)量= 3215.4×ΔA÷W=3215.4×0.0994÷0.1=3196.108 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0730/BC0735  丙酮酸羧化酶(PC)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0920/BC0925  果糖-1,6-二磷酸FBP活性檢測(cè)試劑盒


        磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測(cè)試劑盒 微量法 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測(cè)試劑盒 微量法


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