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        • 乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-12
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Acetokinase(ACK) Activity Assay Kit
        別名
        乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC3175
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途乙酸激酶(ACK)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒說明書
        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號BC3175
        規(guī)格100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體15 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×12-8℃保存
        試劑三粉劑×2-20℃保存
        試劑四粉劑×1-20℃保存
        試劑五粉劑×1-20℃保存
        試劑六液體48 μL×12-8℃保存
        試劑七液體55 μL×1-20℃保存
        試劑八粉劑×12-8℃保存
        試劑九粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 提取液:臨用前將試劑九加入到提取液中,并于2-8℃保存;

        2. 試劑二:臨用前每瓶加入1 mL蒸餾水,充分溶解待用。用不完的試劑仍2-8℃保存;

        3. 試劑三:臨用前每瓶加入1 mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑-20℃保存;

        4. 試劑四:臨用前每瓶加入2 mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑-20℃保存;

        5. 試劑五:臨用前每支加入0.5 mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑-20℃保存;

        6. 試劑六:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前根據(jù)樣本量將試劑、蒸餾水按43:457(V:V)的比例配制備用,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        7. 試劑七:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前根據(jù)樣本量將試劑、蒸餾水按1:9(V:V)的比例配制備用,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        8. 試劑八:臨用前加入5 mL蒸餾水,充分溶解待用。用不完的試劑仍2-8℃保存;

        9. 工作液:吸取0.06 mL 試劑二、0.2 mL試劑三、0.13 mL試劑四、0.04 mL試劑五、0.04 mL試劑六、0.04 mL試劑七、0.2 mL試劑八混勻,也可根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配,于冰上備用。

        產(chǎn)品說明:
        ACK廣泛存在于生物體內(nèi),催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是細(xì)菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶,尤其是在古細(xì)菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
        測定原理如下:(1)ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙 酮酸激酶催化ADPPEP生成ATP和丙 酮酸,(3)乳酸脫氫酶催化丙 酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下測定NADH氧化生成NAD+

        速率,即可反映ACK活性。
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        自備的儀器和用品
        臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

        操作步驟具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

        注意事項(xiàng):

        1. 測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失活。

        2. 反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,比色皿測定時(shí)可取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

        3. ΔA大于1時(shí),建議稀釋后測量,注意計(jì)算公式乘以稀釋倍數(shù);ΔA小于0.01時(shí),建議延長反應(yīng)時(shí)間測量,注意計(jì)算公式變化。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g腎臟組織樣本,加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定1-A測定2=1.7666-1.0488=0.7178,ΔA空白=A空白1-A空白2=1.3902-1.3553=0.0349ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.7178-0.0349=0.6829,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得ACK(U/g 質(zhì)量)=536×ΔA÷W=536×0.6829÷0.1=3660.344 U/g 質(zhì)量

        2. 500萬大腸桿菌加入1mL提取液超聲破碎,離心,取上清后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定1-A測定2=1.3965-1.3503=0.0462,ΔA空白=A空白1-A空白2=1.3902-1.3553=0.0349ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.0462-0.0349=0.0113,按細(xì)菌數(shù)量計(jì)算酶活得ACK(U/104 cell)=1.072×ΔA=1.072×0.0113=0.0121136 U/104 cell。

        參考文獻(xiàn):

        1. Mukhopadhyay S, Hasson M S, Sanders D A. A continuous assay of acetate kinase activity: Measurement of inorganic phosphate release generated by hydroxylaminolysis of acetyl phosphate[J]. Bioorganic chemistry, 2008, 36(2): 65-69.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶ICL活性檢測檢測試劑盒
        BC3120/BC3125 植物脫氫酶PDHA活性檢測試劑盒
        BC2010/BC2015 乙醇酸氧化酶(GO)活性檢測試劑盒

        乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 微量法 乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 微量法

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