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        • 單寧酶活性檢測試劑盒 抗氧化
        產(chǎn)品名稱:

        單寧酶活性檢測試劑盒 抗氧化

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-12
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        單寧酶活性檢測試劑盒 抗氧化
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Tannase Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4070
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途單寧酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        單寧酶活性檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
        貨號:BC4070
        規(guī)格:50T/24S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體75 mL×2瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×22-8℃保存
        標準品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前取1支加入1.5 mL無水乙醇混勻溶解,用不完的試劑可以2-8℃保存一周;

        2. 標準品:5 mg沒食子酸丙酯。臨用前加入1.178 mL無水乙醇充分混勻溶解,配成20 μmol/mL的標準溶液,2-8℃保存兩周。

        產(chǎn)品說明:
        單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),存在于富含單寧的植物,也廣泛存在于微生物中,可以水解酯鍵和縮酚羧鍵,生成沒食子酸和葡萄糖。
        使用沒食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物,其在270nn下有特征吸收峰,根據(jù)其反應(yīng)前后吸光度的變化來計算單寧酶活力。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計、1mL石英比色皿、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
        1、組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
        2、細胞或細菌樣本的制備:先收集細胞或細菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。10000rpm,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
        二、測定步驟

        1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min,波長調(diào)至270nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 標準液的稀釋:取10μL 20μmol/mL的標準溶液,加入3990μL提取液,充分混勻,配制成0.05μmol/mL標準液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實驗中每管需要1000μL,為減小實驗誤差,故配制大體積。)

        3. 對照管樣本處理:吸取0.1mL樣本于1.5mLEP管中作為對照管,沸水浴5min,冷卻至常溫待測

        4. 加樣表(在1.5mLEP管中分別加入)

        試劑名稱(μL測定管對照管
        提取液850850
        試劑一5050
        樣本100100(已滅活)
        混勻,置于40水浴鍋中準確反應(yīng)10min,立即沸水浴5min,冰浴冷卻常溫。10000rpm,室溫離心10min,取上清液待測
        上清液5050
        提取液950950
        充分混勻后測定270nm下的吸光度,分別記為A測定、A對照,計算ΔA測定=A對照-A測定。另取1000μL標準液于石英比色皿中,測定270nm處的吸光度,記為A標準。每個測定管需設(shè)一個對照管。標準管只需測1-2次


        注意事項:
        如果A測定大于1.5,可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù),保證總體積1mL不變,如20μL上清液和980μL提取液(相當(dāng)于F=1000/20=50計算公式中需改變F和V上清液的數(shù)值。
        實驗實例:

        1. 取0.1g玉蘭葉加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A對照-A測定=1.126-1.033=0.093,按樣本質(zhì)量計算酶活得:單寧酶(U/g質(zhì)量)=1000×ΔA÷A標準÷W=1000×0.093÷0.609÷0.1=1527.09 U/g 質(zhì)量。


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