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        • 單寧酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        單寧酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-12
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        中文名稱(chēng)
        單寧酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱(chēng)
        Tannase Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需自備試劑,詳情見(jiàn)網(wǎng)站說(shuō)明書(shū)

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢(xún)
        分子式詳詢(xún)純度詳詢(xún)
        分子量詳詢(xún)貨號(hào)BC4075
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途單寧酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        單寧酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
        貨號(hào):BC4075
        規(guī)格:100T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件
        提取液液體120 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×22-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前取1支加入1 mL無(wú)水乙醇混勻溶解,用不完的試劑可以2-8℃保存一周;(1支粉劑溶解后可做100T,為了延長(zhǎng)使用時(shí)間,此產(chǎn)品多給1支粉劑)

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:5 mg沒(méi)食子酸丙酯。臨用前加入1.178 mL無(wú)水乙醇充分混勻溶解,配成20 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,2-8℃保存兩周。

        產(chǎn)品說(shuō)明:
        單寧酶全稱(chēng)是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),存在于富含單寧的植物,也廣泛存在于微生物中,可以水解酯鍵和縮酚羧鍵,生成沒(méi)食子酸和葡萄糖。
        使用沒(méi)食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物,其在270nn下有特征吸收峰,根據(jù)其反應(yīng)前后吸光度的變化來(lái)計(jì)算單寧酶活力。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96UV板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
        1、組織:稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液,冰浴勻漿。10000rpm 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
        2、細(xì)胞或細(xì)菌樣本的制備:先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。10000rpm4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,波長(zhǎng)調(diào)至270nm,紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋?zhuān)喝?μL 20μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入1995μL提取液,充分混勻,配制成0.05μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實(shí)驗(yàn)中每管需要200μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積。)

        3. 對(duì)照管樣本處理:吸取0.02mL樣本于1.5mLEP管中作為對(duì)照管,沸水浴5min,冷卻至常溫待測(cè)。

        4. 加樣表(在1.5mLEP管中分別加入)

        試劑名稱(chēng)(μL測(cè)定管對(duì)照管
        提取液170170
        試劑一1010
        樣本2020(已滅活)
        混勻,置于40水浴鍋中準(zhǔn)確反應(yīng)10min,立即沸水浴5min,冰浴冷卻常溫10000rpm,室溫離心10min,取上清待測(cè)。
        上清液1010
        提取液190190
        充分混勻后測(cè)定270nm處的吸光度,分別記為A測(cè)定、A對(duì)照,計(jì)算ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定。另取200μL標(biāo)準(zhǔn)液于微量石英比色皿/96孔UV板中,測(cè)定270nm處的吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2次。


        注意事項(xiàng):
        如果A測(cè)定大于1.5,可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù),保證總體積0.2mL不變,如5μL上清液和195μL提取液(相當(dāng)于F=200/5=40),計(jì)算公式中需改變FV上清液的數(shù)值。
        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g玉蘭葉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A對(duì)照管-A測(cè)定管=0.6631-0.6258=0.0373,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:單寧酶(U/g質(zhì)量)=1000×ΔA÷A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F(稀釋倍數(shù))=1119 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC1360/BC1365 尿酸(UA)含量檢測(cè)試劑盒
        BC1340/BC1345 植物總酚(TP)含量檢測(cè)試劑盒
        BC1330/BC1335 植物類(lèi)黃酮含量檢測(cè)試劑盒

        單寧酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 單寧酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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