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        • 肉桂酸-4-羥化酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        肉桂酸-4-羥化酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-12
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        肉桂酸-4-羥化酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Cinnamic acid 4-hydroxylase(C4H) Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S
        自備

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4085
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途肉桂酸-4-羥化酶(C4H)活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        肉桂酸-4-羥化酶(C4H)活性檢測試劑盒說明書
        微量法
        貨號:BC4085
        規(guī)格:100T/96S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體20 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×22-8℃保存
        試劑三粉劑×22-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前取一瓶粉劑加入2 mL乙醇溶解備用。2-8℃保存4周。

        2. 試劑三:臨用前取一瓶粉劑加入2 mL雙蒸水充分溶解待用。現(xiàn)配現(xiàn)用。-20℃分裝可保存4周,避免反復凍融。

        產(chǎn)品說明:
        C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,是催化桂皮酸形成咖啡豆、香豆酸的酶。C4H多存在于高等植物、酵母、菌類中,屬于細胞木質(zhì)素合成途徑中間的關鍵酶。
        C4H催化肉桂酸和NADPH生成4-香豆酸鹽和NADP,在340nm下測定NADPH的減少速率,即可反映C4H活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96UV板、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
        1、組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心15分鐘,取上清,置冰上待測。
        2、細胞或細菌樣本的制備:先收集細胞或細菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次)。12000g,4℃離心15min,取上清,置冰上待測。
        二、測定步驟

        1. 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min,波長調(diào)至340nm,紫外分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2. 加樣表(微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入)

        試劑名稱(μL測定管
        試劑一140

         

        試劑二20
        試劑三20
        樣本20

        充分混勻后立即測定10s時在340nm下的吸光度,記為A1,之后迅速將其放入37水浴或37℃培養(yǎng)箱中3min(若酶標儀帶有控溫功能,將溫度調(diào)為37)。然后迅速拿出擦凈后測定190s時的吸光度,記為A2。計算ΔA=A1-A2。

        注意事項:
        ΔA大于0.4時,建議將樣本用提取液稀釋后測量;ΔA過小時,建議增加酶促反應時間(5min10min)或增加加入的樣本體積來測定。
        實驗實例:

        1. 取0.1g黃豆(發(fā)芽)加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,使用微量石英比色皿測得計算ΔA=A1-A2=1.1227-0.9854=0.1373,按樣本質(zhì)量計算酶活得C4H酶活(U/g質(zhì)量)=535.91×ΔA÷W=535.91×0.1373÷0.1=735.80 U/g 質(zhì)量。

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