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儲(chǔ)存條件
-20℃
中文名稱
莽草酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒其它系列
有效期
6個(gè)月
單位
盒
英文名稱
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

詢價(jià)留言

產(chǎn)品概述

品牌	SOLARBIO/索萊寶	CAS	詳詢
分子式	詳詢	純度	詳詢
分子量	詳詢	貨號(hào)	BC4180
規(guī)格	50T/48S	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	莽草酸脫氫酶(SD)活性檢測(cè)	應(yīng)用領(lǐng)域	環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

莽草酸脫氫酶（SD）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
紫外分光光度法
貨號(hào): BC4180
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，用前搖勻。
試劑二：臨用前加入10 mL蒸餾水溶解。
試劑三：臨用前每瓶加入11 mL蒸餾水溶解。
工作液的配制：根據(jù)用量按照試劑一：試劑二：試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配，用前25℃預(yù)熱15min。

產(chǎn)品說(shuō)明：
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH，檢測(cè)340nm下的吸光值增加速率來(lái)表示SD活性。
Shikimic Acid +NADP NADPH(340nm)
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（加入前搖勻））進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2、細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3、液體：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
工作液25℃預(yù)熱10min以上。
操作表：在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑：

試劑名稱	空白管	測(cè)定管
工作液（µL）	950	950
樣本（µL）	-	50
蒸餾水（µL）	50	-
加入樣本即開始計(jì)時(shí)，充分混勻后于340nm處測(cè)定20s時(shí)的吸光值A1和5min20s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

注意事項(xiàng)：

樣本提取上清液置于冰上待測(cè)，且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測(cè)完。
樣本的蛋白濃度需自行測(cè)定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需扣除提取液自身蛋白濃度。
ΔA大于1時(shí)，建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí)，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（10min或15min）來(lái)測(cè)定。
空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下，變化不超過(guò)0.01。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

取0.1g蘿卜葉，加入1mL提取液，進(jìn)行樣本處理，取上清按照測(cè)得步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=1.441-1.201=0.24，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.24，按照樣本質(zhì)量計(jì)算得：SD酶活（U/g 質(zhì)量）=643×ΔA÷W=1543.2 U/g 質(zhì)量。

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