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        • 肉桂醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列
        產(chǎn)品名稱:

        肉桂醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-12
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        肉桂醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說(shuō)明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC4170
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
        紫外分光光度法
        貨號(hào):BC4170
        規(guī)格:50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×1-20℃保存
        試劑二液體×12-8℃保存
        試劑三液體50 mL×1瓶2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 提取液:內(nèi)含不溶物,使用前搖勻。

        2. 試劑一:臨用前加入15 mL試劑三溶解??扇芙夂蠓盅b-20保存,避免反復(fù)凍融。

        3. 試劑二:液體置于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管中。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻,配好后2-8℃保存。

        4. 工作液的配制:將試劑一、試劑二、試劑三按1:1:2(V:V:V)的比例配制工作液,工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明:
        CAD 是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一,催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應(yīng)的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
        CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+,在340nm下測(cè)定NADPH消耗速率,即可反映CAD活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、乙醇和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
        1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
        2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑:

        試劑名稱空白管測(cè)定管
        樣本(µL)-100
        蒸餾水(µL)100-
        工作液(µL)900900
        在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于25℃水浴5min,拿出迅速擦干測(cè)定5min10s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

        三、CAD酶活計(jì)算

        1. 按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
        CAD酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=321.54×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每g組織每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
        CAD酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷W

        1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
        CAD酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷500×V÷V樣總)÷T=0.643×ΔA
        εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.001L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn);109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。
        注意事項(xiàng):
        1、當(dāng)A1小于0.8,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
        2、空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,變化不超過(guò)0.04
        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取約0.1g三葉草葉,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清,按照測(cè)定步驟操作,測(cè)定計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.532-1.462=0.07,ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.012-1.007=0.005ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.07-0.005=0.065,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:CAD酶活(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W=209.001 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶(ICL)活性檢測(cè)檢測(cè)試劑盒
        BC3170/BC3175 乙酸激酶(ACK)活性檢測(cè)試劑盒

        肉桂醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列 肉桂醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列

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