原果膠含量檢測(cè)試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號(hào)：BC3680

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 提取液一：80%乙醇，自備。即將80 mL無水乙醇和20 mL蒸餾水混合。

2、 試劑一：濃硫酸60 mL，自備。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg半乳糖醛酸，臨用前加入0.943 mL提取液三，配成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，不溶性果膠為原果膠。原果膠是不溶于水的物質(zhì)，但可在酸、堿、鹽等化學(xué)試劑及酶的作用下，加水分解轉(zhuǎn)變成水溶性果膠，在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。

原果膠在堿性條件下水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物，在530nm處有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、丙酮、濃硫酸、無水乙醇和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

取約0.1g樣本，加入1mL 提取液一，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小時(shí)，4000g 25℃離心10min，棄上清，加入1mL提取液三，充分勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清液待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用提取液三稀釋為0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、 操作表：

三、原果膠含量的計(jì)算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測(cè)定帶入方程得到x（μmol/mL）。

2、 原果膠含量的計(jì)算：原果膠含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三：加入提取液三的體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、 濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子，以防液體飛濺燒傷。

2、 若ΔA超過0.6，可將樣本用提取液三進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g木槿加入1mL 提取液一，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入1mL提取液二浸泡15小時(shí)，4000g 25℃離心10min，棄上清，加入1mL提取液三，充分勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清液之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.194-0.044=0.15，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.9322x-0.0232，計(jì)算X=0.1858μmol/mL；按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：原果膠含量(μmol/g 質(zhì)量)= x÷W=1.858 μmol/g 質(zhì)量。

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