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        • 4-香豆酸:輔*A連接酶活性檢測(cè)試劑盒 其它
        產(chǎn)品名稱:

        4-香豆酸:輔*A連接酶活性檢測(cè)試劑盒 其它

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-15
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        4-香豆酸:輔*A連接酶活性檢測(cè)試劑盒 其它
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        4-Coumarate CoA Ligase(4CL) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC4220
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途4-香豆酸:輔*A連接酶(4CL)活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        4-香豆酸:輔*A連接酶(4CL)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
        紫外分光光度法
        貨號(hào): BC4220
        規(guī)格: 50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體30 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×1-20℃保存
        試劑三液體6 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑四粉劑×1-20℃保存
        試劑五粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 提取液:內(nèi)含不溶物,使用前搖勻;

        2. 試劑二:臨用前加入6 mL蒸餾水溶解,可以分裝后-20保存,避免反復(fù)凍融;

        3. 試劑四:臨用前用6 mL蒸餾水溶解備用,可以分裝后-20保存,避免反復(fù)凍融;

        4. 試劑五:加入1 mL乙醇溶解,臨用前用蒸餾水稀釋40倍后備用,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        5. 工作液的配制:按體積比將試劑二:試劑三:試劑四:試劑五=1:1:1:1的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說(shuō)明:
        4-香豆酸:輔*A連接酶(4-coumarate:CoA ligase4CL)是木質(zhì)素生物合成的關(guān)鍵酶之一,主要催化肉桂酸及其羥基或者甲氧基衍生物生成相應(yīng)的輔*A酯,這些中間產(chǎn)物隨后進(jìn)入苯丙類衍生物支路合成途徑。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,為減少水果石細(xì)胞含量而提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
        4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA,其在333nm下測(cè)有特征吸收峰,測(cè)定4-香豆酸CoA的生成速率,即可反映4CL活性。
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。
        操作步驟:

        • 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。


        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至333nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 操作表(在1.5mLEP管中進(jìn)行下列操作):


        測(cè)定管空白管
        樣本(µL)100-
        蒸餾水(µL)-100
        工作液(µL)400400
        試劑一(µL)500500
        充分混勻后測(cè)定333nm下的10s初始值A(chǔ)1,37反應(yīng)1h后再次測(cè)定1h 10s吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定管-A1測(cè)定管,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白

        三、4CL活性計(jì)算

        1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

        單位定義:每mg組織蛋白每小時(shí)生成1nmol 4-香豆酸輔*A定義為一個(gè)酶活力單位。
        4CL(U/mg prot=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=476.19×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算:

        單位定義:每g組織每小時(shí)生成1nmol 4-香豆酸輔*A定義為一個(gè)酶活力單位。
        4CL(U/g 質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=476.19×ΔA÷W

        1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

        單位定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)生成1nmol 4-香豆酸輔*A定義為一個(gè)酶活力單位。
        4CL(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.9124×ΔA
        V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3L;ε4-香豆酸輔*摩爾消光系數(shù),2.1×104L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mLT:反應(yīng)時(shí)間,1h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn);109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol
        注意事項(xiàng):

        1. ΔA大于0.5,將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

        2. 建議一次測(cè)定不要測(cè)定過(guò)多樣本以免耽誤過(guò)多的酶促反應(yīng)時(shí)間。

        3. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,變化不超過(guò)0.01。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1g芥菜加1mL提取液進(jìn)行樣本處理,取上清后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定管-A1測(cè)定管=0.784-0.655=0.129,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.129,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:4CL(U/g 質(zhì)量)=476.19×ΔA÷W=476.19×0.129÷0.1=614.29 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2010/BC2015 乙醇酸氧化酶(GO)活性檢測(cè)試劑盒
        BC4170/BC4175 肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測(cè)試劑盒
        BC4180/BC4185 莽草酸脫氫酶(SD)活性檢測(cè)試劑盒
        BC4200/BC4205 木質(zhì)素含量檢測(cè)試劑盒

        4-香豆酸:輔*A連接酶活性檢測(cè)試劑盒 其它 4-香豆酸:輔*A連接酶活性檢測(cè)試劑盒 其它

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