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        • 淀粉脫分支酶活性檢測(cè)試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        淀粉脫分支酶活性檢測(cè)試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-15
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        中文名稱
        淀粉脫分支酶活性檢測(cè)試劑盒
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Starch debranching Enzyme(SBE) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC4250
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途淀粉脫分支酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        淀粉脫分支酶(DBE)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
        可見分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
        貨號(hào):BC4250
        規(guī)格:50T/24S
        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體50 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體15 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二粉劑×22-8℃保存
        試劑三液體15 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑四液體42 mL×1瓶2-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前取1瓶加入3 mL試劑一,充分溶解后待用,用不完的試劑2-8保存4周;

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg無(wú)水*萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解,配成10 mg/mL葡萄糖溶液備用,2-8可保存兩周。

        產(chǎn)品說(shuō)明:
        淀粉脫分支酶(starch debranching enzyme,DBE)能夠?qū)R?、高效的裂解支鏈淀粉?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif;">α-1,6-糖苷鍵,對(duì)淀粉的結(jié)構(gòu)起修飾"的作用,淀粉脫分支酶在調(diào)整支鏈淀粉側(cè)鏈的鏈長(zhǎng)方面起著關(guān)鍵作用,淀粉分支酶和淀粉脫分支酶的平衡使得支鏈淀粉合成。

        DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生還原糖,其與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成棕紅色物質(zhì),通過(guò)測(cè)定其在540nm下吸光值變化可計(jì)算得DBE活性。
         
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計(jì)、臺(tái)式低溫離心機(jī)、水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)
        1、組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后15000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
        2、細(xì)胞或細(xì)菌:按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量(104個(gè))︰提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后15000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
        3、液體:直接檢測(cè)。(若溶液有渾濁則離心后取上清測(cè)定)
        二、測(cè)定步驟

        1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 將10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        序號(hào)稀釋前濃度(mg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL)蒸餾水體積(µL)稀釋后濃度(mg/mL)
        11010019000.5
        20.54001000.4
        30.53002000.3
        40.52003000.2
        50.51004000.1

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需200µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        1. 取250μL樣本沸水浴5min(蓋緊,防止水分散失),冷卻至室溫后,8000g,常溫離心5min,取上清備用。

        2. 操作表 (在1.5mL離心管中) :

        試劑名稱(µL)對(duì)照管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管
        煮沸樣本200---
        樣本-200--
        標(biāo)準(zhǔn)溶液--200-
        蒸餾水---200
        試劑一200-200200
        試劑二-200--
        混勻,37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)2 h
        試劑三200200200200
        試劑四600600600600
        混勻,沸水浴5min(蓋緊,防止水分散失),取出后立即冷卻至室溫,測(cè)定540nm處吸光值A,分別記為A對(duì)照管,A測(cè)定管,A標(biāo)準(zhǔn)管,A空白管。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管(標(biāo)準(zhǔn)曲線、空白管只需檢測(cè)1-2次)。

        注意:37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)2h后,離心管底部可能有沉淀,無(wú)需離心,直接進(jìn)入下一步試驗(yàn)即可。
        三、DBE活性計(jì)算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將ΔA帶入方程得到xmg/mL)。

        1. DBE活性的計(jì)算:

        (1)按蛋白濃度計(jì)算
        酶活定義:每mg蛋白每小時(shí)分解支鏈淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
        DBE酶活(U/mg prot=x×V提取÷V提取×Cpr÷T=0.5x÷Cpr
        (2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
        酶活定義:每g樣本每小時(shí)分解支鏈淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
        DBE酶活(U/g質(zhì)量)=x×V提取÷W÷T=0.5x÷W
        (3)按細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算
        酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解支鏈淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
        DBE酶活(U/104 cell)=x×V提取÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))÷T=0.5x÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))
        (4)按液體體積計(jì)算
        酶活定義:每mL樣本每小時(shí)分解支鏈淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
        DBE酶活(U/mL=x×V÷V÷T =0.5x
        V提取:提取液體積,1mLV樣:加入的樣本體積,0.2mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間:2h
        注意事項(xiàng):

        1. A大于1時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

        2. 建議每次實(shí)驗(yàn)沸水浴后冷卻時(shí)間保持一致。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g大米,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后15000g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測(cè),取上清后再用提取液稀釋10倍,之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.390-0.125=0.265,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.248x-0.1896,計(jì)算x=0.202,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        DBE酶活(U/g質(zhì)量)=0.5x÷W×10(稀釋倍數(shù))=10.1 U/g質(zhì)量。
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2040/BC2045  β-淀*酶(β-AL)活性檢測(cè)試劑盒
        BC1850/BC1855  可溶性淀粉合成酶(SSS)活性檢測(cè)試劑盒
        BC3290/BC3295  結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)活性檢測(cè)試劑盒
        BC1860/BC1865  淀粉分支酶(SBE)活性檢測(cè)試劑盒

        淀粉脫分支酶活性檢測(cè)試劑盒  淀粉脫分支酶活性檢測(cè)試劑盒 

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