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        • 纖維素(CLL)含量檢測試劑盒 糖代謝
        產(chǎn)品名稱:

        纖維素(CLL)含量檢測試劑盒 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-15
        儲存條件
        2-8℃
        纖維素(CLL)含量檢測試劑盒 糖代謝
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Cellulose Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4280
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途纖維素(CLL)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        纖維素(CLL)含量檢測試劑盒說明書
        可見分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號:BC4280
        規(guī)格:50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液一液體200 mL×1瓶(自備)2-8℃保存
        提取液二液體60 mL×12-8℃保存
        試劑一粉劑×22-8℃保存
        試劑二液體10 mL×12-8℃保存
        標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 提取液一:80%乙醇200 mL,即將160 mL無水乙醇和40 mL蒸餾水混合,自備。提供一個(gè)125 mL空瓶。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg葡萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解,配成10 mg/mL葡萄糖溶液備用,2-8℃保存兩周。

        3. 工作液的配制:取一瓶試劑一中加入2.5 mL試劑二,充分混勻,如較難溶解,可充分震蕩或加熱攪拌;用不完的試劑可以2-8℃保存一周。

        產(chǎn)品說明:
        纖維素是由β-D-葡萄糖單元以 β-1,4-糖苷鍵連接而成的直鏈多聚體,通常與半纖維素、果膠及木質(zhì)素結(jié)合在一起,是植物細(xì)胞壁的主要結(jié)構(gòu)成分。以纖維素為原料的產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于食品、造紙、塑料、電工及科研器材等領(lǐng)域。


        纖維素在酸性條件下加熱能分解成β-D-葡萄糖。在強(qiáng)酸作用條件下利用與蒽酮顯色劑測定纖維素含量。\

        技術(shù)指標(biāo):
        低檢出限:0.0023 mg/mL
        線性范圍:0.003125-0.09 mg/mL
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計(jì)、臺式低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰盒、B酮、濃硫酸、無水乙醇、蒸餾水和EP管。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
         

        1. 細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)的提取:

        1. 稱取約0.3g(記為W1)樣本,加入1mL提取液一,室溫快速勻漿,90℃水浴20min,冷卻至室溫,6000g,25℃離心10min,棄上清。

        2. 沉淀先后用1.5mL提取液一和B酮各洗兩遍(渦旋振蕩2min左右,6000g25℃離心10min,棄上清即可),沉淀即為粗細(xì)胞壁。

        3. 在粗細(xì)胞壁中加入1mL提取液二(去除淀粉)浸泡15小時(shí),6000g,25℃離心10min,棄上清,將沉淀用蒸餾水清洗兩遍(渦旋振蕩2min左右,6000g25℃離心10min,棄上清即可),之后干燥沉淀(60-100℃均可),得到細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM),稱重記為W2。

        1. 纖維素的提?。?/span>

        1. 稱取烘干的CWM約 5mg(記為W3),加入0.5mL蒸餾水充分勻漿,勻漿液轉(zhuǎn)移至EP管中,用蒸餾水定容至0.5mL

        2. 將定容后的勻漿液置于冰水混合物中,緩慢加入0.75mL濃硫酸,緩慢混勻,冰水浴中靜置30min。8000g,4℃離心10min,取上清液,用蒸餾水稀釋20倍后待測。

        注意:1. 若樣本或者干燥后的沉淀質(zhì)地堅(jiān)硬,可以先研碎再進(jìn)行后續(xù)步驟
        2. 在提取纖維素的過程中,首先,置于冰水浴中的EP管需要固定,不要上下左右浮動,一方面保障自身安全,另一方面防止冰水混合物進(jìn)入EP管造成試驗(yàn)誤差;再者,加入濃硫酸時(shí),建議槍頭伸入樣本液面以下,緩慢加入,防止液面沸騰及樣本碳化。
        二、測定步驟

        1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 將10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.09、0.08、0.07、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

        序號稀釋前濃度(mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL蒸餾水體積(µL稀釋后濃度(mg/mL
        1105049500.1
        20.1450500.09
        30.14001000.08
        40.13501500.07
        50.15005000.05
        60.055005000.025
        70.0255005000.0125
        80.01255005000.00625

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需300µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        1. 操作表 (在1.5mL離心管中) :

        試劑名稱(µL測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管
        樣本300--
        標(biāo)準(zhǔn)溶液-300-
        蒸餾水--300
        工作液707070
        濃硫酸630630630

         



         

        混勻,置95℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),取出后冷卻至室溫,測定620nm處吸光值A,分別記為A測定管,A標(biāo)準(zhǔn)管,A空白管。計(jì)算ΔA=A測定管-A空白管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。(空白管及標(biāo)準(zhǔn)曲線均只需檢測1-2次)

        三、纖維素含量計(jì)算
        1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,mg/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔAy,ΔA)帶入公式計(jì)算樣本濃度(x,mg/mL
        2、纖維素含量的計(jì)算:
        (1)按樣本質(zhì)量計(jì)算
        纖維素(mg/g 質(zhì)量)=x×V提取×20×W2÷W3÷W1÷1.11=22.52×x×W2÷W3÷W1
        (2)按樣本細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)質(zhì)量計(jì)算
        纖維素(mg/g干重)=x×V提取×20÷W3÷1.11=22.52x÷W3
        1.11:是此法測得葡萄糖含量換算為纖維素含量的常數(shù),即111 µg葡萄糖用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于100µg纖維素蒽酮試劑所顯示的顏色;V提?。豪w維素提取液體積,1.25mL0.5mL蒸餾水+0.75mL濃硫酸);20:樣本稀釋倍數(shù);W1:樣本質(zhì)量,0.3g;W2:樣本細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)質(zhì)量,g;W3,提取纖維素時(shí)稱取的細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)質(zhì)量,g
        注意事項(xiàng):

        1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

        2. 濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性,操作時(shí)各個(gè)步驟均需特別注意:纖維素提取在加入濃硫酸時(shí),建議槍頭伸入樣本液面以下,緩慢加入,以防止液體飛濺燒傷;95℃水浴結(jié)束取出后需冷卻至室溫再打開EP管蓋,以防液體飛濺燒傷。

        3. 由于試劑二揮發(fā)性強(qiáng)且具有刺激性氣味,建議在通風(fēng)櫥中進(jìn)行工作液的配制。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.3g康乃馨葉片樣本提取細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)0.02g,稱取烘干的CWM5mg(記為W3),提取纖維素,取上清液,用蒸餾水稀釋20倍后進(jìn)行檢測,測得計(jì)算ΔA=A測定管-A空白管=0.821-0.051=0.77,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=13.994+0.0072,計(jì)算x=0.0545,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:

        纖維素(mg/g 質(zhì)量)=22.52×x×W2÷W3÷W1=16.3645 mg/g 質(zhì)量。
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC3330/BC3335  糖原合成酶(GCS)活性檢測試劑盒
        BC3360/BC3365  UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性檢測試劑盒
        BC4440/BC4445  半纖維素含量檢測試劑盒
         

        纖維素(CLL)含量檢測試劑盒 糖代謝  纖維素(CLL)含量檢測試劑盒 糖代謝

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