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        • 肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
        產(chǎn)品名稱:

        肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-15
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Hepatic lipase(HL) Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2380
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途肝酯酶(HL)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        肝脂酶(HL)活性檢測試劑盒說明書
        可見分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
        貨號:BC2380
        規(guī)格:50T/24S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        試劑一液體70 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二液體3 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑三粉劑×12-8℃保存
        試劑四粉劑×2-20℃保存
        標準品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:
        1、試劑三:臨用前加入30 mL蒸餾水,充分溶解待用,用不完的 2-8℃保存8周;
        2、試劑四:臨用前取1瓶加入2 mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑可-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;
        3、標準品:臨用前加入6.94 mL丙 酮,配成10 μmol/mL α-萘酚標準溶液,充分溶解待用,用不完的-20℃保存4周。
        產(chǎn)品說明:
        肝脂酶(hepaticlipase,HL)是一種脂肪分解酶,在肝實質(zhì)細胞中合成,存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細胞表面和竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面,可水解各種脂蛋白中的甘油三酯(TG)和磷脂(PL),使各種脂蛋白顆粒的大小和密度發(fā)生變化,當血漿中的HL及其活性增高時,可導(dǎo)致血漿中低密度脂蛋白(LDL)水平升高,加速動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。
        肝脂酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚,可與固藍B鹽形成紫紅色偶氮化合物,在595 nm有特征吸收峰,其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝脂酶活性成正相關(guān)。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計、天平、低溫離心機、水浴鍋、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、EP管、 丙 酮、蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照質(zhì)量(g)︰試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取樣本約0.1g,加入1mL試劑一),加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000 g離心10 min,取上清待測。
        2、細胞:按照細胞數(shù)量(104個)︰試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1 mL試劑一)加入試劑一,冰浴超聲波破碎細胞(功率300W,超聲3秒,間隔7秒,總時間3 min);然后于4℃,10000g離心10 min,取上清待測。
        3、血清/血漿:直接檢測。(若液體有渾濁則離心后進行測定)
        二、測定步驟

        1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至595 nm,用蒸餾水調(diào)零。

        2. 將試劑一在30℃預(yù)熱20 min以上。

        3. 將10 μmol/mL 的標準溶液用試劑一稀釋為1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078 μmol/mL的標準溶液備用。

        4. 標準品稀釋表

        序號稀釋前濃度(µmol/mL)標準液體積(µL)試劑一體積(µL)稀釋后濃度(µmol/mL)
        110503501.25
        21.252002000.625
        30.6252002000.3125
        40.31252002000.15625
        50.156252002000.078

        實驗中每個標準管需100µL標準溶液。

        1. 操作表:(在1.5 mL離心管中依次加入下列試劑)

        試劑名稱對照管測定管標準管空白管
        (µL)100100--
        標準溶液(µL)--100-
        試劑一(µL)450400400500
        試劑二(µL)-505050
        混勻,30℃反應(yīng)10 min--
        試劑三(µL)400400400400
        試劑四(µL)50505050
        充分混勻,測定595 nm處吸光值,分別記為A對照管、A測定管、A標準管和A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。(每個測定管需設(shè)一個對照管,空白管和標準管需做1-2次)

        三、HL酶活計算

        1. 標準曲線的繪制:

        根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準(y,ΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,ΔA(y,ΔA帶入公式計算樣本濃度(xμmol/mL)。

        1. HL酶活的計算:

        (1)按蛋白濃度計算
        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1 μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
        HL活性(U/mg prot=x×V÷V×Cpr÷T=0.1x÷Cpr
        (2)按樣本質(zhì)量計算
        酶活定義:每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1 μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
        HL活性(U/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)÷T=0.1x÷W
        (3)按照細胞數(shù)量計算
        酶活定義:每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1 μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
        HL活性(U/104 cell)=x×V÷V×N÷V樣總)÷T=0.1x÷N
        (4)按液體體積計算
        酶活定義:每毫升血清/血漿每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
        HL活性(U/mL=x×V÷V÷T=0.1x
        V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.1 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入試劑一體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,10 min;N:細胞數(shù)量,以萬計
        注意事項:

        1. 若樣本為動物肝臟,建議將樣本用試劑一稀釋25倍以上再進行檢測,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2. 若樣本為肥胖型動物血清或血漿,建議將樣本用試劑一稀釋5倍以上再進行檢測,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        3. ΔA大于0.8時,建議將樣本用試劑一稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        實驗實例:

        1. 取0.1g大鼠肝臟,進行樣本處理,取上清稀釋48倍后按照操作步驟進行操作,測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.713-0.001=0.712,帶入標準曲線y = 0.6381x - 0.0005,計算x=1.1166,按照樣本質(zhì)量計算酶活得:HL活性(U/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)÷T×48=53.597 U/g 質(zhì)量。

        2. 取火雞血清稀釋12倍后按照操作步驟進行操作,測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.572-0.003=0.569,帶入標準曲線y = 0.6381x - 0.0005,計算x=0.892,按照液體體積計算酶活得:HL活性(U/mL=x×V÷V÷T×12=1.071 U/mL

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2340/BC2345  脂肪酶(LPS)活性檢測試劑盒
        BC0620/BC0625  甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒
        BC2440/BC2445  脂蛋白酯酶(LPL)活性檢測試劑盒
        BC0320/BC0325  植物中脂氧合酶(LOX)活性檢測試劑盒
        BC0590/BC0595  游離脂肪酸(FFA)含量檢測試劑盒

        肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝 肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝

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