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        • 糖原合成酶(GCS)檢測(cè)試劑盒 糖代謝
        產(chǎn)品名稱(chēng):

        糖原合成酶(GCS)檢測(cè)試劑盒 糖代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-15
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱(chēng)
        糖原合成酶(GCS)檢測(cè)試劑盒 糖代謝
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱(chēng)
        Glycogen synthase(GCS) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC3330
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途糖原合成酶(GCS)檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        糖原合成酶(GCS)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        紫外分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào):BC3330

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱(chēng)

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體45 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體40 μL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑五

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑六

        液體115 μL×1

        2-8℃保存

        試劑七

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑八

        粉劑×2

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑四:提供一個(gè)5 mL試劑瓶,用前取1支加入3mL試劑一充分溶解,-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2、 試劑五:提供一個(gè)5 mL試劑瓶,用前取1支加入3mL試劑一充分溶解,-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3、 工作液的配制:臨用前將試劑三離心,取20 μL試劑三,加14 mL試劑一、3 mL試劑四、3mL試劑五,充分混合(約26T),現(xiàn)用現(xiàn)配,也可根據(jù)樣本量按比例配制;

        4、 試劑八的配制:

        (1) 臨用前取1瓶試劑八中加入6mL試劑二充分溶解,再將1支試劑七轉(zhuǎn)移到試劑八中混合溶解后待用,可-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        (2) 用前先將試劑六離心,取55 μL試劑六加入5.74 mL上述(1)中溶液,充分混合(約28T),現(xiàn)用現(xiàn)配,也可根據(jù)樣本量按比例配制。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        糖原合成酶(Glycogen synthase , GCS)將UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非還原端,以α-1,4糖苷鍵連接。GCS是動(dòng)物機(jī)體糖原合成過(guò)程的限速酶,同時(shí)也是胰島素作用的主要靶酶,在糖代謝及維持血糖相對(duì)穩(wěn)定的過(guò)程中有著重要作用。

        GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH生成NAD+,在340 nm下測(cè)定NADH的下降速率,即可反映GCS活性。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、超聲破碎儀、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后,8000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        細(xì)菌或細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        血清等液體:直接檢測(cè)。(若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定)

        二、測(cè)定步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 臨用前將工作液與試劑八置于37℃水浴鍋中預(yù)熱5min(工作液用多少預(yù)熱多少)。

        3、 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑:

        試劑名稱(chēng)(µL

        空白管

        測(cè)定管

        樣本

        -

        50

        蒸餾水

        50

        -

        工作液

        750

        750

        試劑八

        200

        200

        加入樣本即開(kāi)始計(jì)時(shí),充分混勻后于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A11min 10s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

        三、GCS酶活計(jì)算

        1. 按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        GCS酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×Cpr÷T= 3215.4×ΔA÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每克樣本每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        GCS酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×W÷V樣總)÷T =3215.4×ΔA÷W

        3. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

         

        GCS酶活(U/104 cell=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè)))÷T

        = 3215.4×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

        4. 按液體體積計(jì)算

        酶活定義:每毫升液體每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        GCS酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷T =3215.4×ΔA

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol;

        V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.05mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入提取液體積,1mLT:反應(yīng)時(shí)間:1min。

        注意事項(xiàng):

        1、 樣本提取上清液置于冰上待測(cè),提取樣本建議當(dāng)天測(cè)完。

        2、 ΔA大于0.2,建議將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定,以提高檢測(cè)靈敏度,并在計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g小鼠心臟加入1mL提取液進(jìn)行樣本處理,取上清后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.177-1.119=0.058,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.944-0.939=0.005ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.058-0.005=0.053,按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        GCS酶活(U/g 質(zhì)量)=3215.4×ΔA÷W=1704.162 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0360/BC0365  β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2600/BC2605  酸性木聚糖酶(ACX)活性檢測(cè)試劑盒

        BC4290/BC4295  N-乙?;?/span>-β-葡萄糖苷酶(NAG)活性檢測(cè)試劑盒

        糖原合成酶(GCS)檢測(cè)試劑盒 糖代謝 糖原合成酶(GCS)檢測(cè)試劑盒 糖代謝 

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