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        • 糖原磷酸化酶b(GPb)檢測試劑盒 糖原
        產(chǎn)品名稱:

        糖原磷酸化酶b(GPb)檢測試劑盒 糖原

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-15
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        糖原磷酸化酶b(GPb)檢測試劑盒 糖原
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Glycogen Phosphorylase b (Gpb) Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC3350
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途糖原磷酸化酶b(GPb)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        糖原磷酸化酶bGPb)活性檢測試劑盒說明書

        紫外分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào)BC3350

        規(guī)格50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體50 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑五

        粉劑×3

        -20℃保存

        試劑六

        粉劑×3

        -20℃保存

        試劑七

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入1.25 mL蒸餾水,充分混勻;2-8℃保存2個(gè)月;

        2、 試劑三:臨用前加入1.25 mL餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3、 試劑四:臨用前加入1.25mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        4、 試劑五:臨用前每支加入1 mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        5、 試劑六:臨用前每支加入1 mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        6、 試劑七:臨用前加入4 mL蒸餾水,充分混勻后-20分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        7、 工作液的配制:臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需用量,按照試劑一:試劑二:試劑三:試劑四 =740μL: 20μL: 20μL: 20μL1T的量)的比例,充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配

        產(chǎn)品說明:

        糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關(guān)鍵酶,催化糖原的磷酸化反應(yīng)。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶aGlycogen phosphorylase a, GPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGlycogen phosphorylase b, GPb)兩種形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶a的催化下進(jìn)行。未添加激活劑時(shí),糖原磷酸化酶a催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測定NADPH上升速率,即可反映糖原磷酸化酶a活性。添加激活劑測定GPGPaGPb)總活性,未添加激活劑時(shí)測定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。340nm下測定NADPH上升速率,即可反映糖原磷酸化酶a活性。

         

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、電子天平、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、1 mL石英比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

        2、血清(漿):直接檢測。若有渾濁可以離心后取上清進(jìn)行測定。

        3、細(xì)菌或者細(xì)胞:先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至340 nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 工作液置于37℃預(yù)熱5min。

        3、 GPa活性:在石英比色皿中依次加入50 μL樣本、50 μL試劑五、50 μL試劑六、50 μL蒸餾水800 μL工作液,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄340nm10s時(shí)吸光值A1,37℃水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)10min,反應(yīng)后拿出迅速擦干測定10min10s時(shí)吸光值A2。計(jì)算ΔAGPa=A2-A1

        4、 GP活性:在石英比色皿中依次加入50 μL樣本、50 μL試劑五、50 μL試劑六、50 μL試劑七、800 μL工作液,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄340nm10s時(shí)吸光值A337℃水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)10min,反應(yīng)后拿出迅速擦干測定10min10s時(shí)吸光值A4計(jì)算ΔAGP=A4-A3

        三、 糖原磷酸化酶b (GPb)活性計(jì)算

        1. 樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        GPbU/mg prot=[(ΔAGP-ΔAGPa) ×V反總÷(ε×d)×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa) ÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        GPbU/g 質(zhì)量)=[(ΔAGP-ΔAGPa) ×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa) ÷W

        3. 按樣本體積計(jì)算

        單位定義:每mL液體每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位

        GPaU/mL=[(ΔAGP-ΔAGPa) ×V反總÷(ε×d)×109] ÷V÷T=321.54× (ΔAGP-ΔAGPa)

        4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        單位定義:每1萬個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

        GPaU/104 cell=[(ΔAGP-ΔAGPa) ×V反總÷(ε×d)×109] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

        =321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷細(xì)胞數(shù)量

        V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 LεNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:以萬計(jì);1091mol=109nmol

        注意事項(xiàng):

        1、如果測定吸光值ΔA0.8,建議稀釋樣本后再測定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加反應(yīng)中的樣本體積或者樣本質(zhì)量后再進(jìn)行測定。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 稱取0.1 g兔子肝臟組織,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,8000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測。按照測定步驟操作,用石英比色皿比色后計(jì)算ΔAGPa=A2-A1=0.414-0.318=0.096,ΔAGP=A4-A3= 0.434-0.320 =0.114,按公式計(jì)算活性:

        GPbU/g 質(zhì)量)=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa) ÷W =321.54×(0.114-0.096)÷0.1 =57.87U/g 質(zhì)量

        糖原磷酸化酶b(GPb)檢測試劑盒 糖原 糖原磷酸化酶b(GPb)檢測試劑盒 糖原

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