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        • 蔗糖磷酸化酶活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        蔗糖磷酸化酶活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-15
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        蔗糖磷酸化酶活性檢測試劑盒
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Sucrose Phosphorylase(SP)Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC0455
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途蔗糖磷酸化酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

         

        蔗糖磷酸化酶(SP)活性檢測試劑盒說明書微量法

        貨號BC0455

        規(guī)格100T/96S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑一

        液體7.5 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1瓶

        2-8℃保存

        試劑三

        液體1mL×1支

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×2支

        -20℃保存

        試劑五

        粉劑×1瓶

        -20℃保存

        試劑六

        粉劑×2支

        -20℃保存

        試劑七

        粉劑×2支

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入6 mL蒸餾水,充分混勻。2-8℃可以保存4周。

        2、 試劑四:臨用前取1支加入0.6 mL蒸餾水,充分混勻。分裝后-20℃保存,避免反復凍融,可以保存2周;

        3、 試劑五:粉劑置于瓶內(nèi)玻璃管中。臨用前加入10 mL蒸餾水,充分混勻。-20℃分裝保存,避免反復凍融,可以保存4周;

        4、 試劑六:臨用前取1支加入1 mL蒸餾水,充分混勻(可做100T,為保證試劑盒使用時間,故多給一支);可分裝后-20℃保存,避免反復凍融,-20℃可以保存2周;臨用前按試劑六:蒸餾水=1:1的比例稀釋試劑六,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        5、 試劑七:臨用前取1支加入0.7 mL蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存,避免反復凍融,-20℃可以保存2周;臨用前按試劑七:蒸餾水=1:1的比例稀釋試劑七,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明

        蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,屬于糖基水解酶13家族,是一種催化轉(zhuǎn)移葡萄糖苷鍵的酶,能夠催化蔗糖和無機磷酸鹽合成1-磷酸-葡萄糖。該酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖為供體,多類物質(zhì)如多羥基的糖和糖醇、酚羥基、羧基等為受體,催化合成各種糖苷。

        SP能夠催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導致340nm光吸收值增加。通過340nm吸光度的增加速率來反映SP活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品

         

        紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、微量石英比色皿/96孔UV板、冰和蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)為1︰5-10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min ,取上清置于冰上待測。

        2、細胞或細菌:先收集細胞或細菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細胞或細菌數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500-1000︰1的比例(建議500萬個細胞或細菌加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞或細菌(功率200 W,超聲3秒,間隔7秒,總時間3 min);然后10000 g,4℃,離心10 min ,取上清置于冰上待測。

        3、液體:直接檢測。若液體渾濁可離心后取上清測定。

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計/酶標儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至340 nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2、 試劑一37℃預(yù)熱10min。

        3、 操作表:

        試劑名稱(µL)

        空白管

        測定管

        試劑一

        85

        65

        試劑二

        50

        50

        試劑三

        5

        5

        試劑四

        10

        10

        試劑五

        10

        10

        試劑六

        20

        20

        試劑七

        20

        20

        混勻,37℃水浴預(yù)熱5min

        樣本(μL)

        -

        20

        迅速吹打混勻,記錄測定管第15s的吸光值A(chǔ)1測定(A1空白),迅速置于37℃水浴或培養(yǎng)箱2min(酶標儀有控溫功能可將溫度調(diào)至37℃),拿出迅速擦干測定2min15s時的吸光值A(chǔ)2測定(A2空白),計算ΔA =(A2測定-A1測定)-(A2空白-A1空白)。

        空白管只需測定1-2次,如果樣本數(shù)量過多也可以將試劑一到試劑七按上述比例混勻后進行測定。

        二、SP活性計算:

        1、 用微量石英比色皿測定的計算公式:

        (1) 按照蛋白濃度計算

        酶活定義:37℃,每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。

        SP活性(U/mg prot)=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T = 803.85×ΔA÷Cpr

        (2) 按照樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:37℃,每克樣本每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。

        SP活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 803.85×ΔA÷W

         

        (3) 按照細胞數(shù)量計算

        酶活定義:37℃,每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。

        SP活性(U/104 cell)= ΔA÷ε÷d×V反總×10 9÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量(萬個))÷T

        = 803.85×ΔA÷細胞數(shù)量(萬個)

        ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6220 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.0002L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:提取液體積,1mL ;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時間,2min;109:1mol=109nmol。

        2、 用96孔板測定的計算公式:

        將上述公式中的d-1cm修改為d-0.6cm(96孔板光徑)進行計算即可。

        注意事項:

        1、如果測定吸光值A(chǔ)>1,建議用提取液稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進行測定。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1 g土豆,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,10000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測。使用微量石英比色皿按照測定步驟操作,計算ΔA=(0.4070-0.3117)-(0.0956-0.0949)=0.0946。計算活性:

        蔗糖磷酸化酶酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε÷d×V反總×10 9÷(V樣÷V樣總×W)÷T =760.44 U/ g質(zhì)量

        2、 稱取0.1 g黑米,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,10000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測。使用微量石英比色皿按照測定步驟操作,計算ΔA =(0.4559-0.3546)-(0.0956-0.0949)=0.1006,計算活性:

        蔗糖磷酸化酶酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε÷d×V反總×10 9÷(V樣÷V樣總×W)÷T =808.67 U/ g質(zhì)量

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0580/BC0585 蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒

        BC0570/BC0575 中性轉(zhuǎn)化酶(NI)活性檢測試劑盒

        BC0560/BC0565 酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)活性檢測試劑盒

        BC0600/BC0605 蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性檢測試劑盒

        蔗糖磷酸化酶活性檢測試劑盒 蔗糖磷酸化酶活性檢測試劑盒

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