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        • 乙酰輔*A含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        乙酰輔*A含量檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Acetyl Co-A Activity Assay Kit
        乙酰輔*A含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        別名
        乙酰輔*A試劑盒 乙酰輔*A測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC0985
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義:乙酰輔*A廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        乙酰輔*A含量檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC0985

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體0.6 mL×2

        -20℃保存

        試劑

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑二

        液體5 μL×2

        2-8℃保存

        試劑三A

        液體25 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三B

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑:臨用前加入163μL試劑,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        2、 試劑:臨用前1支先將液體甩離至管底,然后加入125μL試劑,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        3、 試劑:臨用前取1試劑三B加入12mL試劑三A,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

        4、 工作液:臨用前將試劑、按照1:1:90的比例混合,根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用。

        產(chǎn)品說明:

        乙酰輔*A廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物體能源物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物,在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰輔*A匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經(jīng)過這條通路氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于ATP合成。此外,乙酰輔*A是合成脂肪酸、酮體、膽*醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。

        蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD+生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔*A和草酰乙酸生成檸檬酸和輔*A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng),乙酰輔*A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰輔*A含量的高低。

         

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式低溫離心機(jī)、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織:建議稱取約0.1g樣本,加入0.99mL提取液0.01mL提取液二進(jìn)行冰浴勻漿。于4℃,8000g離心10min,取上清,置于冰上待測(cè)。

        2. 細(xì)胞或細(xì)菌:建議500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入0.99mL提取液0.01mL提取液二,冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌(功率200w,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),于4℃,8000g離心10min,取上清,置于冰上待測(cè)。

        3. 血清(漿)或其他液體:直接檢測(cè),若液體有渾濁則離心后測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 將工作液37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱10min。

        3. 50μL樣本和205μL工作液至微量石英比色皿或96UV板,混勻,立即記錄340nm20s的吸光值A180s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

        三、乙酰輔*A含量計(jì)算

        A、使用微量石英比色皿測(cè)定

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        乙酰輔*A含量(nmol/g 質(zhì)量)=(ΔA÷ε÷d)×V×109÷V×V÷W×F=819.9×ΔA÷W×F

        2. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        乙酰輔*A含量(nmol/104 cell)=(ΔA÷ε÷d)×V×109÷V×V÷500×F=1.640×ΔA×F

        3. 按液體體積計(jì)算

        乙酰輔*A含量(nmol/mL)=(ΔA÷ε÷d)×V×109÷V×F=819.9×ΔA×F

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol;V反:反應(yīng)總體積,2.55×10-4L;V樣:加入樣本上清體積,0.05mL;V提:加入提取液一和提取液二的總體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量,500萬;F:稀釋倍數(shù)。

        B、使用96UV板測(cè)定

        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96UV板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 稱取0.1g兔腎加入0.99mL提取液0.01mL提取液二進(jìn)行勻漿研磨,離心后取上清,稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA= A2-A1=0.8083-0.7691=0.0392,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得

        乙酰輔*A含量(nmol/g 質(zhì)量)=819.9×0.0392÷0.1×2=642.8 nmol/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶α-KGDH)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2150/BC2155 檸檬酸(CA)含量檢測(cè)試劑盒

        BC0950/BC0955 琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0380/BC0385 丙 酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2160/BC2165 線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)活性檢測(cè)試劑盒

        乙酰輔*A含量檢測(cè)試劑盒 微量法 乙酰輔*A含量檢測(cè)試劑盒 微量法

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