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        • 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性檢測(cè)試劑盒微量
        產(chǎn)品名稱:

        磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性檢測(cè)試劑盒微量

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性檢測(cè)試劑盒微量
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Phosphoenolpyruvate Carboxylase(PEPC) Activity Assay Kit
        別名
        磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶試劑盒 PEPC Kit 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)試劑盒 磷酸烯

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2195
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義:PEPC(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC2195

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體2 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體2 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑五

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑六

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑六溶解液

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑七

        粉劑×1

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑四:臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解待用;可分裝后-20℃保存4,避免反復(fù)凍融;

        2、 試劑五:臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解待用;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3、 試劑六:臨用前加入250μL 試劑六溶解液溶解;可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        4、 試劑七:臨用前加入5.26 mL蒸餾水,可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        5、 工作液的配制:根據(jù)樣本數(shù)量按體積比試劑二:試劑三:試劑四:試劑五:試劑六:試劑六溶解液:試劑七=270μL270μL270μL270μL35μL325μL360μL(共1.8mL,20T)的比例混合。工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(EC 4.1.1.31廣泛存在于植物和微生物中,在動(dòng)物及絲狀霉菌中缺乏此酶。是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應(yīng)生成草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶,同時(shí)也是C4植物和CAM植物固定CO2的關(guān)鍵酶,對(duì)三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要調(diào)節(jié)作用。

        PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm測(cè)定NADH減少速率,計(jì)算PEPC活性。

        Phosphoenolpyruvate + CO2                                   Oxalylacetic Acid + HPO42-

        Oxalylacetic Acid + NADH                        Malic acid + NAD+

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者

        增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后,8000g,4℃,離心20min。

        2、細(xì)菌或細(xì)胞:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測(cè)。

        3、血清(漿)等液體:直接檢測(cè)。若有渾濁則離心后取上清測(cè)定。

        二、測(cè)定步驟

        1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2、 根據(jù)樣本量取部分試劑一和工作液置于30℃平衡10min。

        3、 操作表(在微量石英比色皿/96UV板中分別加入下列試劑):

        試劑名稱(μL)

        測(cè)定管

        空白管

        試劑一

        90

        90

        工作液

        90

        90

        樣本

        20

        -

        蒸餾水

        -

        20

        在微量石英比色皿/96UV板中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于30℃水浴或培養(yǎng)箱5min(酶標(biāo)儀有控溫功能的可將溫度調(diào)至30℃),拿出迅速擦干測(cè)定310s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次)

        三、PEPC酶活計(jì)算

        1、 按微量石英比色皿計(jì)算:

        1)按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPC酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=321×ΔA÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPC酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T =321×ΔA÷W

        3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        PEPC酶活(U/104 cell=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷V樣總×N÷T=321×ΔA÷N

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4LV樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入提取液體

        積,1mLT:反應(yīng)時(shí)間:5min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmolN:細(xì)胞數(shù)量,以萬計(jì)。

        2、 按96UV板計(jì)算:

        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。

        注意事項(xiàng):

        1、 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),ΔA大于0.6時(shí),建議將粗酶液用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí),可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(10min15min)來測(cè)定。

        2、 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,變化不超過0.02。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g天竺葵葉片加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.013-0.9753=0.0377,ΔA空白=A1空白-A2空白=0.8407-0.8392=0.0015,ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.0377-0.0015=0.0362,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活:

        PEPC酶活(U/g質(zhì)量)=321×ΔA÷W=321×0.0362÷0.1=116.202 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g蘆薈葉片加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A1測(cè)定-A2測(cè)定=0.7049-0.6699=0.035ΔA空白=A1空白-A2空白=0.8407-0.8392=0.0015,ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.035-0.0015=0.0335,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活:

        PEPC酶活(U/g質(zhì)量)=321×ΔA÷W=321×0.0355÷0.1=107.535 U/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Zhang Y H, Wang Z M, Huang Q, et al. Phosphoenolpyruvate carboxylase activity in ear organs is related to protein concentration in grains of winter wheat[J]. Journal of cereal science, 2008, 47(2): 386-391.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0740/BC0745  己糖激酶(HK)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0540/BC0545  丙酮酸激酶(PK)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0530/BC0535  磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒


         磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性檢測(cè)試劑盒微量 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性檢測(cè)試劑盒微量

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