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        • 果糖-1,6-二磷酸醛縮酶檢測(cè)試劑盒UV板微量
        產(chǎn)品名稱:

        果糖-1,6-二磷酸醛縮酶檢測(cè)試劑盒UV板微量

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        果糖-1,6-二磷酸醛縮酶檢測(cè)試劑盒UV板微量
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Fructose-bisphosphate aldolase(FBA) Activity Assay Kit
        別名
        果糖-1,6-二磷酸醛縮酶試劑盒 FBA Kit 果糖-1,6-二磷酸醛縮酶(FBA)試劑盒 果糖-1

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2275
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義: 果糖1,6-二磷酸醛縮酶(EC4.1.2.13)是糖酵解和糖異生途徑應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        果糖-1, 6-二磷酸醛縮酶(FBA)活性檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        貨號(hào):BC2275

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體110 mL×1

        2-8保存

        提取液二

        液體110 mL×1

        2-8保存

        試劑一

        液體10 mL×1

        2-8保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8保存

        試劑四

        液體×1

        2-8保存

        試劑五

        液體×1

        -20保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入2 mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

        2、 試劑三:臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

        3、 試劑四:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑-分裝后20℃保存,禁止反復(fù)凍融

        4、 試劑五:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明:

        果糖1,6-二磷酸醛縮酶(Fructose 1,6 bisphosphate aldolaseFBA)(EC4.1.2.13)是糖酵解、糖異生、磷酸戊糖途徑及光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶,催化果糖1,6-二磷酸可逆的裂解為磷酸二羥丙酮和3-磷酸甘油醛,廣泛存在于動(dòng)植物及微生物體內(nèi),在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應(yīng)。

        果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮,在磷酸丙糖異構(gòu)酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NADα-磷酸甘油,340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、低溫離心機(jī)、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、漩渦震蕩儀、超聲破碎儀、冰。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))


        FBA酶:

        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液一)充分冰浴勻漿,然后8000g,4,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        細(xì)菌或細(xì)胞:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        液體:直接檢測(cè)。

        胞漿和葉綠體FBA酶的分離:

        (1) 按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15-10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),手工快速研磨或勻漿,之后于4200g離心5min;

        (2) 棄沉淀,取上清在4,8000g離心10min(離心時(shí)緩慢加速和降速);

        (3) 取上清用于測(cè)定胞漿FBA酶活性取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4,8000g離心10min,上清即為葉綠體中FBA酶活性。

        建議測(cè)定總FBA酶活性,按照步驟提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBA,則按照步驟提取粗酶液。

        二、測(cè)定步驟

        1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 樣本測(cè)定:(在微量石英比色皿/96UV板中分別加入下列試劑)


        測(cè)定管

        空白管

        試劑一(µL

        100

        100

        試劑二(µL

        20

        20

        試劑三(µL

        20

        20

        試劑四(µL

        20

        20

        試劑五(µL

        20

        20

        樣本(µL

        20

        -

        蒸餾水(µL

        -

        20

        充分混勻后于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于37(哺乳動(dòng)物)或25(其他物種)水浴5min(有控溫功能的酶標(biāo)儀可以將溫度調(diào)至37或者25),拿出迅速擦干測(cè)定310s時(shí)的吸光值A2,分別記為A1測(cè)定、A2測(cè)定、A1空白和A2空白,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次)

        注意:如果檢測(cè)樣本量大,可以將試劑一、二、三、四、五按照5:1:1:1:1V:V:V:V:V)的比例配成工作液待用(現(xiàn)配現(xiàn)用)。

        三、FBA酶活計(jì)算

        A、 按微量石英比色皿計(jì)算:

        1、按蛋白濃度計(jì)算

        酶活單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FBA酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr


        2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活單位定義:每g組織每分消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FBA酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷W ×V÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

        3、按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

        酶活單位定義:每104個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FBA酶活(U/104 cell=ΔA÷ε×d×109×V反總÷(V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))4、按液體體積計(jì)算

        酶活單位定義:每mL液體每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        FBA酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=321.54×ΔA

        V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定W:樣本質(zhì)量,g109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol

        B、按96UV板計(jì)算:

        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。

        注意事項(xiàng):

        1、若ΔA大于0.8建議將樣本用相應(yīng)提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧龠M(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2、若是植物樣本,建議在提取完成后2h內(nèi)檢測(cè)完,如果樣本量過大,建議分批提取、檢測(cè)。

        3、由于提取液一中含有一定濃度的蛋白(約0.5mg/mL),所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清稀釋8后按照測(cè)定步驟操作,使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.3061-1.125=0.1811,ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.1983-1.1858=0.0125,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.1811-0.0125=0.1686,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活:

        FBA酶活(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W×8(稀釋倍數(shù))= 321.54×0.1686÷0.1×8(稀釋倍數(shù))=4337 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g綠蘿加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測(cè)定步驟操作,使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.4458-1.37=0.0758ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.1983-1.1858=0.0125,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.0758-0.0125=0.0633,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活:

        FBA酶活(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W=321.54×0.0633÷0.1=204 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC2240/BC2245  果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量檢測(cè)試劑盒

        BC0530/BC0535  磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒

         

        果糖-1,6-二磷酸醛縮酶檢測(cè)試劑盒UV板微量 果糖-1,6-二磷酸醛縮酶檢測(cè)試劑盒UV板微量 

         

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